主题：【原创】对LC的认识（3）

    今天我要给大家讲的是LC一些使用技巧的方面，都是个人的理解，望大家指正。
      第一点：在进行梯度洗脱时，第一针先进溶剂预平衡下色谱柱，这样做的目的是：可以判断是否因为梯度而引起一些杂峰，而且可以扣除背景吸收，并且可以在所设定的梯度体系下活化柱子，可谓有很多好处。
      第二点：对于一个未知样品，如果用反相色谱分析，首先用纯有机相确定目标组分的保留性，再根据“三倍规则”调整，以得到满意的分离度和分离效果。
      第三点：很多人都只知道得到的色谱峰越尖锐、峰高越高越好，但为什么这样好却不怎么理解。这是因为：峰越尖锐，峰高越高说明柱效越高；事实上峰尖锐和峰展宽两种情况下峰面积是一样大的，只不过是峰越尖锐使得峰面积积分越准确，灵敏；受阈值的影响小。
      第四点：判断色谱峰是否纯的话可以根据纯度因子来判断，我知道Agilent有纯度因子的显示窗口，纯度因子最大值为1000，纯度因子小于900说明肯定不纯，纯度因子越接近1000说明可能越纯。
      第五点：关于加标回收率，分为实际样品加标回收率和方法的加标回收率，这个在认识（2）中我已经阐述过，关于加标浓度，一般为样品浓度的0.5-2倍。
      第六点：对于为什么缓冲液选择磷酸的解释，相比其它酸，一般选择磷酸效果会更好。这是因为，磷酸的紫外背景吸收最小，而且达到相同的PH值所需磷酸的量最少。
      第七点：关于过滤白头何时需要更换，打开purge阀，脱气时发现压力超过10bar的话，说明过滤的白头该更换了，再就是LC最大的问题是压力的升高，这里一定要先判断是否是柱子导致的，因为系统的压力主要是由柱子贡献的，用分段排除的方法排除故障是个很好的办法。
      第八点：配置缓冲液的时候，一次尽量配得多一点，因为重复配置总会有差异的，所以对保留时间总是会有一定的影响，这个我曾经验证过。
      第九点：关于保留时间提前或者推后的问题（反相），保留时间提前如果不是流动相的问题，最有可能是就是样品太脏的缘故；因为样品脏导致里面的杂质占据了硅羟基的结合位点，使得目标组分在柱子上的结合变得更弱了。保留时间推后最有可能是有机相挥发的缘故。事实上色谱峰重现性不好的一个原因大家都知道：有可能是柱平衡时间不够的缘故。
    由于经验太多，一时也不知从何说起，先谈一些，以后慢慢写了给大家指正。