主题:【求助】梯度洗脱设置问题

浏览0 回复12 电梯直达
kuki777
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
1、需要的采用的梯度是:0-12min,磷酸缓冲液从100%降到97%,甲醇从0至3%;12-22min,磷酸缓冲液从97%降到90%,甲醇从3至10%,请问这个梯度程序改怎么设置啊?
              序号    时间    A%              B%
工作站设置界面是上面那样的

2、关于流动相问题。我打算这样操作:流动相开始是乙腈,柱子C8是憎水柱,以乙腈—50%甲醇水—100%磷酸缓冲液(第一梯度平衡, 结束后以100%纯水—20%甲醇水—乙腈这样的顺序来冲洗管路。
请大家看看上面有没有不合适的地方?比如说甲醇水的比例,我查了数据,50%甲醇水粘度是1.6左右,纯乙腈粘度是0.89,平衡时粘度从0.89突然到1.60会不会增加太快?
以100%磷酸缓冲液来平衡和100%纯水冲洗 会不会有问题(主要是色谱柱的说明书上有这句话:该柱固定相憎水性较强,建议流动相中应有5%以上的可与水互溶的有机溶剂(乙腈或甲醇)?

3、采用梯度洗脱,要连续进几次空白样,是指在进了一针后马上再上一针空白样么?还是等一针运行完梯度洗脱后再进?

谢谢大家!
为您推荐
您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价
专属顾问快速对接
立即提交
可能感兴趣
有水有渝
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
1、你的A、B分别是哪一个流动相?
2、先把系统中的纯有机相用10%甲醇置换后就可以走你的梯度了。清洗系统是分别用10%甲醇和纯甲醇1.0流速,清洗一个小时就行了。
3、进样前先进一个空白,空白进一个就够了,但建议进空白前先预运行完整个梯度过程。
该帖子作者被版主 xue20092积分, 2经验,加分理由:谢谢应助
astromote
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
甲醇太少,建议不低于5%,以免损伤柱子。如果觉得保留太弱,不如换C18的柱子
该帖子作者被版主 xue20092积分, 2经验,加分理由:对的
kuki777
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
1、你的A、B分别是哪一个流动相?
2、先把系统中的纯有机相用10%甲醇置换后就可以走你的梯度了。清洗系统是分别用10%甲醇和纯甲醇1.0流速,清洗一个小时就行了。
3、进样前先进一个空白,空白进一个就够了,但建议进空白前先预运行完整个梯度过程。

A是0.05mol/l的磷酸盐缓冲液,B是甲醇

我看了高压输液泵的说明书,上面写到用了缓冲液后还要连接柱塞清洗流路 清洗柱塞,难道清洗系统的过程没有清洗到柱塞吗?
还有使用了手动进样器,还要冲洗进样口,方法是:用注射器将纯水打入,同时扳动进样阀数次,每次数毫升。一般是六通进样阀吧?这句话“同时扳动进样阀数次”这个该怎么扳动使纯水不进入色谱柱啊?
kuki777
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
1、你的A、B分别是哪一个流动相?
2、先把系统中的纯有机相用10%甲醇置换后就可以走你的梯度了。清洗系统是分别用10%甲醇和纯甲醇1.0流速,清洗一个小时就行了。
3、进样前先进一个空白,空白进一个就够了,但建议进空白前先预运行完整个梯度过程。


我看了你曾经发过的关于液相维护的帖子,中间写到“手动进样器的清洁  先用10%甲醇“LOAD”、“INJECT”各冲洗5ml,再用甲醇置换。”是先扳到LOAD,注入5ml,再扳到INJECT,注入5ml;在INJECT位置,液体直接绕过环路流出了废液管,那在LOAD位置,液体怎么流出去啊?
xue2009
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 kuki777(kuki777) 发表:
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
1、你的A、B分别是哪一个流动相?
2、先把系统中的纯有机相用10%甲醇置换后就可以走你的梯度了。清洗系统是分别用10%甲醇和纯甲醇1.0流速,清洗一个小时就行了。
3、进样前先进一个空白,空白进一个就够了,但建议进空白前先预运行完整个梯度过程。


我看了你曾经发过的关于液相维护的帖子,中间写到“手动进样器的清洁  先用10%甲醇“LOAD”、“INJECT”各冲洗5ml,再用甲醇置换。”是先扳到LOAD,注入5ml,再扳到INJECT,注入5ml;在INJECT位置,液体直接绕过环路流出了废液管,那在LOAD位置,液体怎么流出去啊?

LOAD位置进入定量环,INJECT位置进入色谱柱,有什么问题吗?
有水有渝
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 kuki777(kuki777) 发表:
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
1、你的A、B分别是哪一个流动相?
2、先把系统中的纯有机相用10%甲醇置换后就可以走你的梯度了。清洗系统是分别用10%甲醇和纯甲醇1.0流速,清洗一个小时就行了。
3、进样前先进一个空白,空白进一个就够了,但建议进空白前先预运行完整个梯度过程。

A是0.05mol/l的磷酸盐缓冲液,B是甲醇

我看了高压输液泵的说明书,上面写到用了缓冲液后还要连接柱塞清洗流路 清洗柱塞,难道清洗系统的过程没有清洗到柱塞吗?
还有使用了手动进样器,还要冲洗进样口,方法是:用注射器将纯水打入,同时扳动进样阀数次,每次数毫升。一般是六通进样阀吧?这句话“同时扳动进样阀数次”这个该怎么扳动使纯水不进入色谱柱啊?


少量纯水进入反相色谱柱没关系,但如果是硅胶柱肯定不能进水。
有水有渝
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 xue2009(xue2009) 发表:
原文由 kuki777(kuki777) 发表:
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
1、你的A、B分别是哪一个流动相?
2、先把系统中的纯有机相用10%甲醇置换后就可以走你的梯度了。清洗系统是分别用10%甲醇和纯甲醇1.0流速,清洗一个小时就行了。
3、进样前先进一个空白,空白进一个就够了,但建议进空白前先预运行完整个梯度过程。


我看了你曾经发过的关于液相维护的帖子,中间写到“手动进样器的清洁  先用10%甲醇“LOAD”、“INJECT”各冲洗5ml,再用甲醇置换。”是先扳到LOAD,注入5ml,再扳到INJECT,注入5ml;在INJECT位置,液体直接绕过环路流出了废液管,那在LOAD位置,液体怎么流出去啊?

LOAD位置进入定量环,INJECT位置进入色谱柱,有什么问题吗?


7725i接有两根废液管,其中LOAD位置时,除了滞留在定量环中的,其它多余的从6号排液管排出,INJECT位置清洗时,废液直接5号废液管排出,不进入色谱柱。
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20090410/1831254/
该帖子作者被版主 xue20092积分, 2经验,加分理由:辛苦啦
kuki777
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 xue2009(xue2009) 发表:
原文由 kuki777(kuki777) 发表:
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
1、你的A、B分别是哪一个流动相?
2、先把系统中的纯有机相用10%甲醇置换后就可以走你的梯度了。清洗系统是分别用10%甲醇和纯甲醇1.0流速,清洗一个小时就行了。
3、进样前先进一个空白,空白进一个就够了,但建议进空白前先预运行完整个梯度过程。


我看了你曾经发过的关于液相维护的帖子,中间写到“手动进样器的清洁  先用10%甲醇“LOAD”、“INJECT”各冲洗5ml,再用甲醇置换。”是先扳到LOAD,注入5ml,再扳到INJECT,注入5ml;在INJECT位置,液体直接绕过环路流出了废液管,那在LOAD位置,液体怎么流出去啊?

LOAD位置进入定量环,INJECT位置进入色谱柱,有什么问题吗?
kuki777
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 xue2009(xue2009) 发表:
原文由 kuki777(kuki777) 发表:
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
1、你的A、B分别是哪一个流动相?
2、先把系统中的纯有机相用10%甲醇置换后就可以走你的梯度了。清洗系统是分别用10%甲醇和纯甲醇1.0流速,清洗一个小时就行了。
3、进样前先进一个空白,空白进一个就够了,但建议进空白前先预运行完整个梯度过程。


我看了你曾经发过的关于液相维护的帖子,中间写到“手动进样器的清洁  先用10%甲醇“LOAD”、“INJECT”各冲洗5ml,再用甲醇置换。”是先扳到LOAD,注入5ml,再扳到INJECT,注入5ml;在INJECT位置,液体直接绕过环路流出了废液管,那在LOAD位置,液体怎么流出去啊?

LOAD位置进入定量环,INJECT位置进入色谱柱,有什么问题吗?

恩,谢谢版主,关于这个,现在没啥问题了,剩下的问题是梯度设置了,
kuki777
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
原文由 xue2009(xue2009) 发表:
原文由 kuki777(kuki777) 发表:
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
1、你的A、B分别是哪一个流动相?
2、先把系统中的纯有机相用10%甲醇置换后就可以走你的梯度了。清洗系统是分别用10%甲醇和纯甲醇1.0流速,清洗一个小时就行了。
3、进样前先进一个空白,空白进一个就够了,但建议进空白前先预运行完整个梯度过程。


我看了你曾经发过的关于液相维护的帖子,中间写到“手动进样器的清洁  先用10%甲醇“LOAD”、“INJECT”各冲洗5ml,再用甲醇置换。”是先扳到LOAD,注入5ml,再扳到INJECT,注入5ml;在INJECT位置,液体直接绕过环路流出了废液管,那在LOAD位置,液体怎么流出去啊?

LOAD位置进入定量环,INJECT位置进入色谱柱,有什么问题吗?


7725i接有两根废液管,其中LOAD位置时,除了滞留在定量环中的,其它多余的从6号排液管排出,INJECT位置清洗时,废液直接5号废液管排出,不进入色谱柱。
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20090410/1831254/[/quote]  已经看了,学习了,谢谢!
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
品牌合作伙伴