主题：【第三届原创大赛】我的液相我做主之做液相不求人

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发表于：2010/10/22 00:14:14 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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做液相不求人---我的液相我做主

作提取分离工作的常常会用到高效液相，不管是分析还是制备，应用的时候大家都很小心吧，金贵的东西嘛，老板盯的紧！废话少说，下面谈谈我的应用体会。
HPLC流程结构图：
流动相→溶剂滤头→输液泵→在线过滤器→保护柱→色谱柱→检测器→工作站
一，首先从流动相说起：流动相应该是重蒸过的并以滤膜过滤，以除去机械杂质及有机杂质。其次流动相还应考虑PH值对色谱柱的影响，再次就是流动相的脱气，应该超声五分钟左右，如果泵前输液管出现气泡，则应考虑超声了吗或者脱气机的问题。滤膜使用中应避免水膜用于有机相。
二，输液泵包括进口单相阀，柱塞杆和出口单相阀。其中进口单相阀安装在泵头的下部，出口单相阀安装在泵头的上部，这样有利于气泡的排除，阀体是不锈钢的，里面装宝石小球，安装在阀体进口端的是宝石球座，出口处装有筛网。液体向反方向流时球落于宝石球座内，防止液体回流。
当压力发现很底时，应查看柱塞杆处是否漏液。

三，下面讲一下进样的问题，首先样品应该以流动相溶解0.45微米滤膜过滤。进样多少看具体情况而定.进样时扳到load状态下就不必说了,有一点就是注意定量环的限量,别造成样品浪费.

下面是一些常用的定量环,可自行装卸.
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四，下面讲一讲色谱柱，为了保护色谱柱，在其前安装了保护柱。在使用前应平衡色谱柱，一般反相C18柱甲醇或已腈以10-20倍柱体积平衡，250×4.6的柱体积一般为4毫升.
当柱效降低时会出现峰型变矮变宽,当出现峰裂分时应考虑柱头塌陷问题.
再保存过程中应避免色谱柱受到强震动.
五，再介绍一下检测器,说一下紫外-可见光检测器吧,其工作原理是基于流过检测池流动相对光产生吸收有信号差.
影响紫外-可见检测器灵敏度有关的因素:
1 样品种类，当然啦，不一样的化合物，有其特征的紫外吸收，
2 样品浓度和进样体积
3 检测池的长度,这个基本上咱们是改不了的.
4 所选波长, 灯的能量,（如果检测灵敏度不行了，看是不是氘灯寿命已尽啦）。
5 噪音,
6 流动相,
7 检测器的时间常数,
8 非检测器因素,电噪音,泵脉动.
检测器问题主要就是燥声大了.
当燥声大时应该从以下几点考虑:
1 氘灯损坏,
2 检测池污染,
3 检测池有气泡,
4 是否接地线,
5 压力大致使镜片压坏,
6 参比池污染,此时应该清洗残留液
7 检测池漏液
此时好好的逐一排查了。
六最后，每次用完液相后我们必须做：
1 在使用过含盐缓冲液后最好清水清洗泵15分钟左右，此时须打开排放伐，不能使废液流过色谱柱。(不是必须哦，起码我们没这么做过）
2 关上排放阀用10%的甲醇水溶液冲洗整个系统15-20分钟，次步是为了冲洗系统内其他含盐部位。（其实用纯水也不是不可以，我们就是这么做的）
3 用纯的甲醇或已腈冲洗整个系统半小时左右，次步是为了保护色谱柱。
4 如果未使用缓冲盐，上面1，2步骤可免去。
好了,本人才疏学浅,就介绍这些吧.

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