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离子色谱（IC）
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主题：【求助】DNA片段分析，求专家。

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zl2008boy
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发表于：2010/10/28 13:24:26 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我的一个朋友学生物的，最近正发愁如何对DNA片段进行液相分析。问了下，DNA片段是人工合成的，所以基体并不复杂，目的是通过对目标物的测定，表征之前的生物过程效果（内切什么的），分子量3000左右。由于自己对生物学方面知识薄弱（早已忘记了DNA分子化学结构为何、有何基团），没有提出意见。
回来查了一下。首先看到的是Transgenomic公司wave商品名的DNA分离分析系统。看了下介绍，原来所谓的“分子桥”就是离子对色谱法。对于阴离子（磷酸基团PKA1为1-2）的核酸片段，通过加入三乙基胺醋酸盐，与之形成离子对，通过三乙基胺的疏水性与C18作用，形成保留，然后用乙腈洗脱，似乎没什么专利的内容。后来发现，关键在于那根特别的C18链的DNA分析柱，“无孔多苯乙烯-二乙烯基苯 (PS-DVB)共聚物微球(3微米)与C18形成稳定的固相”。
疑问1：这种非硅胶基质的C18柱有何神奇之处？硅胶基质的C18为能不能做（估计不能，要不就不是专利了）？（硅胶表面的硅羟基会不会和DNA有什么反应）
疑问2：有孔与无孔，对于这种大分子有何不同？孔径方面要选多大的，120A的会堵柱子么？
疑问3：wave仪器的柱温为50-80度之间，分别应对非变性，部分和全部变性。这里的变性为何？一般柱温箱和C18的柱子柱温上限为多少？
文献方面，看到一些用强阴离子交换（SAX）做的。tris-HCl缓冲系统，pH控制在9。此时DNA片段挂在SAX柱上。然后通过NaCl梯度淋洗（Cl-竞争?），洗脱下DNA分子片断。
自己并不懂离子色谱。
疑问1：SAX柱怎么使用和维护？需要注意什么？硅胶基质的和聚合物基质相比除了pH耐受性外有何不同？
疑问2：为何选用NaCl淋洗？淋洗完后，挂在柱上的季胺上的Cl-怎么办？
疑问3：此方法与那个wave相比，优点和缺点为何？
其实疑问有很多，就不一一列出了，希望有经验的前辈多多发言，不吝赐教，小生感激涕零。
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2010/10/28 21:34:20 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
印象中戴安公司有做DNA的，建议你去他们的英文网站上搜一下DNA
原文由 zl2008boy(zl2008boy) 发表:
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