主题：【转帖】盐酸林可霉素造成小鼠肠道菌群失调规律的研究

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发表于：2010/10/29 17:06:27 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

目的：通过观察盐酸林可霉素对小鼠肠道菌群，肠道组织病理学改变，血中淋巴细胞数的影响规律，以期为科学研究正确使用盐酸林可霉素造成菌群失调动物模型提供参考资料。方法：盐酸林可霉素连续灌胃3d停止给药，于停药后第1天，第4天，第7天，和第10天检测肠球菌数，双歧杆菌数，血中淋巴细胞数和肠道病理改变，评价盐酸林可霉素对小鼠肠道菌群的影

响规律。结果：灌胃3d停止用药后第1天和第4天双歧杆菌减少，肠球菌增加，与正常组比较差异有统计学意义(P<0．05)，肠道黏膜皱褶变浅，上皮内杯状细胞减少。停药后第1天出现血中淋巴细胞数减少。结论：盐酸林可霉素短期大量给药，可造成小鼠菌群失调，肠道组织损伤，免疫功能受损，该损伤持续约1周。

盐酸林可霉素是科学研究中用于造成菌群失调动物模型的常用抗生素，其抑制细菌生长，尤其抑制益生菌的作用非常明显，但各家用该药的方法、剂量有较大差别，由于动物的耐受性较强，菌群失调能持续的时间不清，本实验尝试在肠道菌群变化、肠组织损伤等方面来研究林可霉素造成菌群失调的规律。以期为该药在科学研究中的使用提供数据依据，现报告如下。

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2010/10/29 17:06:47 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 动物：SPF级昆明种小鼠，由广东省医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(粤)，体重18—22g，雌雄不限。实验动物质量合格证号，粤监证字2008A022。

1．1．2 药物与试剂：盐酸林可霉素注射液(上海现代哈森药业有限公司的国药准字：H41021941)。

1．1．3 培养基：Bs培养基、肠球菌琼脂，由青岛高科园海博生物技术有限公司出品。

1．2 方法

1．2．1 动物分组及给药：昆明种小鼠25只，随机分为5组：正常组、抗生素1⋯2 3 4组，每组5只。抗生素组给予盐酸林可霉素灌胃，60mg／d连续3d，2次／d，停止给药后分别在第1、4、7、10天解剖小鼠，获取标本，分别为抗生素1⋯2 3 4组；正常组给予生理盐水灌胃，0．2ml／d。

1．2．2 形态行为观察：每天观察和记录各组小鼠外形、活动、饮食、排便情况。

1．2．3 肠道菌群分析：将小鼠断椎处死，常规消毒后找出回盲部，无菌取出盲肠内容物0．1 g，按常规培养细菌。其中Bs培养基(分离双歧杆菌)厌氧培养72h、肠球菌琼脂(分离肠球菌)需氧培养24h~,待菌落长出后，以菌落形态、革兰染色、生化反应鉴定所需目的菌。培养好的细菌经鉴定后计算每克盲肠内容物中的细菌数量，即CFU／g标本。选择菌落适中的稀

释度，算出同一稀释度平均菌落数(X)。

公式：CFU／g标本=X／0．05×稀释倍数×1／标本重量(g)。结果用常用对数值lgCFU／g表示。

1．2．4 肠道病理检查：取盲部用生理盐水冲洗内容物后放置4％多聚甲醛中过夜，行HE染色，观察病理损伤。

1．2．5 淋巴细胞数检测：取各组小鼠全血放置抗凝管中，于血液分析仪分析淋巴细胞数。

2 结果

2．1 形态行为情况：正常组小鼠饮食正常，行动活跃，被毛平整光滑，粪便正常。抗生素1组小鼠摄食量下降，精神萎靡，行动迟缓，被毛无光泽，畏寒扎堆，大便稀湿。

2．2 肠道菌群情况分析：目的菌培养情况统计结果见表1，抗生素1、2组双歧杆菌减少，肠球菌增加，抗生素3、4组与正常组比较差别无意义。

2．3 病理观察结果：大体标本观察发现抗生素1组盲肠肿大充气明显，呈透明状，其余各组不明显；镜下观察正常组肠黏膜结构正常；抗生素1组黏膜皱褶表浅，上皮内杯状细胞数量

有所减少，分泌下降，肠腔内无明显的黏液留；抗生素2组情况与抗生素1组相似，抗生素3、4组情况同正常组。

2．4 血液分析结果：血液分析结果见表1，显示抗生素1组淋巴细胞百分比下降，其余指标如血小板，中性粒细胞百分比等血常规指标(表中未列)未见改变。

3 讨论

盐酸林可霉素是林肯(酰)胺类抗生素，来自链霉菌属，经结构改造后也叫做氯林肯霉素，常用于治疗厌氧菌的感染。需氧的革兰阳性球菌，如葡萄球菌，链球菌对其敏感，但肠球菌例外，厌氧革兰阴性菌也对其敏感。科学研究中常用盐酸林可霉素制作菌群失调动物模型 J，但使用方法和剂量差别很大，本研究旨在探讨盐酸林可霉素大量短时间使用造成菌群失调的特征，以期为今后调节和防治菌群失调的研究打基础。

在本实验中，观察各组小鼠的外观可见，与正常组小鼠比较，抗生素组小鼠明显出现食欲不振、大便稀湿等现象，停药第1天和第4天出现肠球菌增加，双岐杆菌减少，回盲部上皮细胞内杯状细胞减少，分泌功能降低，第7天和第1O天则恢复正常，说明该抗生素可造成细菌数量的异常，肠道结构的改变，肠分泌功能下降，这些方面的变化大约持续了1周，说明损伤持续的时间较短，比较适合用于预防菌群失调疗法时使用；另一方面抗生素使用后短暂出现血中淋巴细胞数减少，其后恢复正常。鞠宝玲等用该模型研究局部和全身免疫状态也有类似的结果，他们研究表明盐酸林可霉素也可造成免疫功能抑制。这些研究均说明林可霉素也可造成免疫功能的降低，可作为研究抗免疫抑制药物的理想模型。菌群失调和免疫抑制两者之间的相互关系如何需今后进一步探讨。

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