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主题：【第三届原创参赛】开放ODS在药物代谢样品前处理中的应用

浏览0 回复35 电梯直达
幽灵龙猫
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发表于：2010/10/31 03:00:02 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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维权声明：本文为xiaodu2007693原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

开放ODS在药物代谢样品前处理中的应用

【前言】

    药物代谢是研究药物在生物体内的吸收、分布、生物转化和排泄等过程的特点和规律的一门科学，即药物分子被机体吸收后，在机体作用下发生的化学结构转化。也是药物研发产业链中的重要环节，贯穿药物研究过程的始终。
    代谢的意义就在于能把外源性的物质包括药物和毒物，进行化学处理，并使其排出体外。药物进入体内经过胃肠道，以及最后吸收进入体内，会发生一系列的复杂的代谢转化，因此发挥药效的不一定是药物本身，也可能是代谢产物。
    从排泄物入手研究药物体内代谢信息是研究药物体内直接作用物质基础的重要研究方法。尿液为排泄物的一种，尿液中来源于药物的代谢产物的分析是药物代谢研究的重要组成部分。

【实验部分】

        本实验拟对某中药的一种有效成分在大鼠体内代谢情况进行预试研究。
        SD大鼠，分为2组(空白组和样品组)，每组2只，连续给药5天，收集尿液浓缩后，过0.45μm微孔滤膜，HPLC-DAD分析。
    给药剂量：空白组：蒸馏水2mL灌胃；样品组：100mg/200g，样品溶于2mL蒸馏水中灌胃。
    目的：主要和大家分享开放ODS对尿液样品前处理效果，通过比较处理前后空白组和样品组的HPLC-DAD液相色谱图，体现开放ODS在样品前处理中的重要作用。

【结果与讨论】

液相色谱条件：
色谱柱：YMC-C18（250×4.6mm，5μm） 
柱    温：28℃
流    速：1 mL/min
进样量：20μL
流动相：0-40min(20%甲醇-100%甲醇)(水相含0.05%TFA)

图1. 处理前---空白组HPLC-DAD谱图


图2. 处理前---样品组HPLC-DAD谱图



    水溶性样品过ODS，先用水洗脱，收集水洗脱部分保存，以防止大极性的Ⅱ相代谢产物被洗脱下来，然后用甲醇洗脱，收集洗脱液，浓缩后，过0.45μm微孔滤膜，HPLC-DAD分析：

图3.处理后---空白组HPLC-DAD谱图


图4.处理后---样品组HPLC-DAD谱图


图5.样品组HPLC-DAD色谱图(局部放大)


【结论】

1. 尿液为动物和人代谢产物排出体外的重要途径之一，动物或人服用药物后，尿液中存在代谢产物，但其中也包括多种内源性物质，如：含氮物质，主要有尿素、尿酸、肌酸和肌酐等，此外还包括无机盐类成分，这些物质大大干扰了代谢产物的检测，因此样品前处理显得尤为重要。

2. 通过比较处理前后的液相色谱图，我们可以发现，样品(空白组和样品组)经开放ODS处理后，内源性物质的干扰显著减少，且吸收减弱，而目标成分，即代谢产物的吸收明显增强。

3. 从处理后的HPLC-DAD色谱图的局部放大谱中，我们可以明显观察到至少7个代谢产物，即图中标示的 M1--M7。

5. 水冲洗可以除去大量无机盐以及水溶性内源性杂质，但建议保留，以防止大极性的Ⅱ相代谢产物被洗脱下来。

6. 开放ODS被成功地应用于该化合物的体内代谢样品前处理过程中。
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yangliguo007
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2010/10/31 9:41:34 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
再用水冲的过程中，会不会将二相代谢产物冲掉呀？
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阿三
junqiwudi
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2010/10/31 10:00:30 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yangliguo007(yangliguo007) 发表:
再用水冲的过程中，会不会将二相代谢产物冲掉呀？
对呀 对代谢产物会不会漏检啊
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kaikaifeng
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2010/10/31 11:01:58 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最后一个图挺不错，看来要毕业了，呵呵
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liuliuhui
liuliuhui
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2010/10/31 11:28:39 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
内源性物质的干扰确实很大！
图3和图4的对比很明显啊！
但怎样证明30分钟前的东西都不是你想要的呢？
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幽灵龙猫
xiaodu2007693
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2010/10/31 11:28:42 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yangliguo007(yangliguo007) 发表:
再用水冲的过程中，会不会将二相代谢产物冲掉呀？

尽量用多的ODS，别超载就行 一般二相代谢产物极性大也不至于被冲出来
为了保险可以将水冲下来的保存 防止这个问题
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幽灵龙猫
xiaodu2007693
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2010/10/31 11:31:54 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 liuliuhui(liuliuhui) 发表:
内源性物质的干扰确实很大！
图3和图4的对比很明显啊！
但怎样证明30分钟前的东西都不是你想要的呢？

主要通过紫外吸收来判断
一般代谢产物会和原形药物有相似的紫外吸收
通过HPLC-DAD检测器可以很直观地看到，进而有目的地寻找代谢产物
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幽灵龙猫
xiaodu2007693
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2010/10/31 11:45:04 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 阿三(junqiwudi) 发表:
原文由 yangliguo007(yangliguo007) 发表:
再用水冲的过程中，会不会将二相代谢产物冲掉呀？
对呀 对代谢产物会不会漏检啊

感谢前2位息友的建议，我当时没考虑这个问题，因为ODS用的比较多，觉得不会被洗下来
但不排除洗下来的可能，所以根据你们的建议已对帖子进行了完善 谢谢
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阿三
junqiwudi
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2010/10/31 11:51:35 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 幽灵龙猫(xiaodu2007693) 发表:
原文由 liuliuhui(liuliuhui) 发表:
内源性物质的干扰确实很大！
图3和图4的对比很明显啊！
但怎样证明30分钟前的东西都不是你想要的呢？

主要通过紫外吸收来判断
一般代谢产物会和原形药物有相似的紫外吸收
通过HPLC-DAD检测器可以很直观地看到，进而有目的地寻找代谢产物
恩 代谢也有使开环或双键还原的 这样吸收就不好判断了 作代谢真的很难啊 楼主厉害啊 祝你顺利啊
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幽灵龙猫
xiaodu2007693
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2010/10/31 13:12:07 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 阿三(junqiwudi) 发表:
原文由 幽灵龙猫(xiaodu2007693) 发表:
原文由 liuliuhui(liuliuhui) 发表:
内源性物质的干扰确实很大！
图3和图4的对比很明显啊！
但怎样证明30分钟前的东西都不是你想要的呢？

主要通过紫外吸收来判断
一般代谢产物会和原形药物有相似的紫外吸收
通过HPLC-DAD检测器可以很直观地看到，进而有目的地寻找代谢产物
恩 代谢也有使开环或双键还原的 这样吸收就不好判断了 作代谢真的很难啊 楼主厉害啊 祝你顺利啊

谢谢阿三专家，确实会有裂解产物，那样紫外吸收会有较大的变化
这时候判断起来确实有难度
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幽灵龙猫
xiaodu2007693
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2010/10/31 21:24:07 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我个人觉得结合了硫酸酯或葡萄糖醛酸的Ⅱ相代谢产物在ODS上被水洗脱下来的可能性比较小，我的某一个成分就是连葡萄糖醛酸的，水是不可能洗脱出来的
得用50%的甲醇才能冲出来
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