主题：【原创】【第三届原创大赛】某植物果实部分化学成分鉴定

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　大家好！！还记得我吗？很久没有参加原创大赛了，在经历了一段时间学习积累和准备之后，这次终于再次来参赛了！！主要目的还是交流和学习！希望大家能够继续支持我哦！！

===================================Show Time========================================

    本次试验采用的材料是一种落叶灌木，为温带及亚热带树种，耐温耐寒性较强，是我国常见园林树木之一，其果实为浆果，球形，直径0.5~0.6厘米，果实产量高为较好的生物原材料，在本实验中通过采用索似抽提法，分光光度法，荧光光度法等多种常用方法对其成分含量进行鉴定，其分离得到的物质主要为：β-胡萝卜素，维生素C，核黄素，粗脂肪物质等。

下面就介绍下这几种主要物质的价值吧：

　　维生素C又称为抗坏血酸，是一种水溶性维生素，其具有抗氧化作用，防止细胞老化，消除疲劳及肌肉酸痛，预防流行性感冒病毒等病毒 入侵，具有抗过敏，预防白内障或防止白内障恶化等作用。

　　核黄素又称维生素B2，6，7-二甲基-(9-D-核糖基)-异咯嗪，为橙黄色晶体[3]，其水溶液具有黄绿色的荧光，且在一定浓度范围内其浓度与荧光强度成正比，当在碱性溶液中或受光照射则很快转化为光黄素，维生素B2具有保护皮肤及黏膜正常功能，还可以分解有毒物质，与胆汁酸及胆汁醇的合成作用有很大的关系。

　　β-胡萝卜素是维生素A的前体，能够较多的储存与肝脏中，但不会出现过量维生素A摄入所致的副作用，因而被称作“无毒维A”，同时，是营养和着色两用的食品添加剂也可作为禽兽饲料添加剂，而且，其对皮肤组织、人体视觉、生殖系统、均有保健作用，除此之外还有促进人体生长发育，延缓衰老，抵抗不良环境对人体的侵害，对癌症防治有很好的辅助作用等功效。

　　脂类物质具有重要的生物功能，它是构成生物膜的重要成分，是机体代谢所需燃料的储存形式，具有营养代谢和调节功能，在集体表面的脂类物质则可防止机械损伤与防止热量散发等保护作用，且作为细胞表面物质与细胞识别，组织免疫等有着密切的关系。

　　鉴于以上其功效，目前国际市场对维生素C，维生素B2，β-胡萝卜素等的需求量很大，然而此类物质主要来源仍依赖于化学工业合成，化学合成其所需的原料物质在不同程度上均具有毒性，且在其生产过程中可能有重金属及有毒物质的污染，致使此类合成物质的应用受到限制，而本实验利用资源丰富的某植物果实作为材料对其进行化学成分鉴定，为其开发利用提供科学依据，同时为维生素C、维生素B2、β-胡萝卜素及脂类物质的生产开辟新方法。

　　1. 材料与方法

　　1.1材料

　　某植物果实

　　1.1.1试剂

　　无水乙醚 2%氢氧化钠乙醇溶液 1%草酸溶液 2%草酸溶液 酸处理过的活性碳2%2，4-二硝基苯肼溶液 9N硫酸溶液 10%硫脲溶液 85%硫酸溶液 标准抗坏血酸溶液 石油醚 标准β-胡萝卜素 标准维生素B2溶液 连二亚硫酸钠

　　1.1.2仪器

　　索氏抽提器，研钵，脱脂棉，电子分析天平，恒温水浴，UNICO—2000型分光光度计，960-型荧光光度计，试管，吸管，移液枪，烘箱，移液管等

　　1.2方法

　　1.2.1粗脂肪的含量测定

　　1.用电子分析天平分别称取干样约1g，5g左右，分别装入事先准备好的滤纸包，滤纸斗中，包好。

　　2.将包好的滤纸包与滤纸斗进行称量，并予以记录。

　　3.小烧瓶内倒入无水乙醚，连接索氏提取器各部分，恒温水浴加热回流约一小时左右。

　　4.提取完毕后取出称量滤纸包质量，通过差重法计算粗脂肪的含量。

　　1.2.2维生素C的含量测定

　　1.将试剂按照下表装入试管中


　　2.进行分光光度值测定，并绘制标准曲线。

　　3.计算维生素C含量值

　　1.2.3 β-胡萝卜素的含量测定

　　分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度对该物质进行定性和定量分析的方法，β-胡萝卜素在211—218nm和450nm处有特征吸收峰，在可见光区，其本身对光有吸收，因此不需要加入显色剂即可测定。

　　1. 标曲的制备


　　2.样品的制备：称取自制的果实提取物0.2500g，石油醚溶解定容到250ml，过滤，为待测液。吸取待测液0.5ml-1.0ml稀释至4ml，OD450测定，从标曲上查找并计算出β-胡萝卜素的含量(μg/ml)。

　　1.2.4维生素B2荧光光度定量测定

　　维生素B2 激发光波长范围为400nm-500nm(一般为460nm)，发射光波长范围约为510nm -550nm，一般为520nm，利用维生素B2在稀溶液中荧光的强度与维生素B2的浓度成正比可进行定量分析。

　　1. 标准曲线的绘制


　　1. 荧光测定

　　以荧光强度对标准溶液浓度绘制出工作曲线，并在同样条件下测定试样的荧光强度，由试样的荧光强度在工作曲线上求出试样中荧光物质含量。

　　2.结果与讨论

　　2.1结果

　　2.1.1粗脂肪的含量测定

　　粗脂肪是脂肪、游离脂酸酸、蜡、磷脂、固醇及色素等脂溶性物质的总称，本实验采用油重法，即利用低沸点有机溶剂乙醚回流抽提，除去有机溶剂，以增加油的重量来计算粗脂肪的含量。

　　公式：粗脂肪% = [(提取前滤纸包质量 – 提取后质量)/ 样品重量]*100%

　　实验数据结果


　　粗脂肪% = [(2.056-1.928)/1.027]*100% = 12.46%

　　2.1.2维生素C的含量测定

　　1.数据结果


　　2.曲线绘制


　　所以可知，样品浓度为：48 (μg/ml)

　　2.1.3β-胡萝卜素的含量测定

　　1. 计算公式：样品中β-胡萝卜素的含量% = (查到的β-胡萝卜素的含量(μg/ml)* 稀释倍数 * 样品体积/样品重量)*100%

　　测量结果：样品OD450 = 0.281

　　故样品中β-胡萝卜素的含量 = [250(μg/ml)*1*50 ml/(35.976-35.9454)] *100%

　　= 40.8%

　　2.曲线绘制


　　2.1.4维生素B2荧光光度定量测定

　　每一个测定溶液的荧光强度读数校正公式为：

　　F = F1 – F2 (F2 = 0)

　　故，F = F1

　　以标准校正后的荧光强度为纵坐标，相应含量为横坐标，作出核黄素测定的标准曲线如下：


　　2.1.4维生素B2荧光光度定量测定

　　每一个测定溶液的荧光强度读数校正公式为：

　　F = F1 – F2 (F2 = 0)

　　故，F = F1

　　以标准校正后的荧光强度为纵坐标，相应含量为横坐标，作出核黄素测定的标准曲线如下：

　　样品荧光强度测定为5.7，故，可得其浓度为：1.125 (μg/ml)

　　2.2讨论

　　2.2.1粗脂肪的含量测定

　　首先，由于乙醚为易燃品，所以在实验过程中要切实注意放火，同时要注意提取器各连接处是否漏气，以及冷凝管冷凝效果是否良好，以免大量乙醚蒸汽外逸。其次，烘烤样品的时间应恰当，保证样品水分除去[6]。

　　在操作中要注意滤纸包必须用细线扎好，保证样品不漏散，包内上下两口塞以脱脂棉。样品包放入浸提管后，其高度不能超过乙醚也面的最高高度。本实验所得粗脂肪含量较低，其主要原因与回流时间不足，在此次实验中回流时间为一小时，此时间内不足以将样品中的脂溶性物质全部提出，故，所得值较小。

　　2.2.2维生素C的含量测定

　　由所绘制的标准曲线可以看出，第3号标液A524值偏离曲线较远，此可能为由于放置时间过长而引起。在此实验中，加入适当的硫脲可以防止维生素C的继续氧化，并促进脎的形成。但是，最终溶液中硫脲的浓度均需一致，否则会影响色度，从而影响结果。除此之外，在滴加硫酸时应边滴边摇试管，这是为防止溶液温度升高，溶液中糖炭化而转为黑色

　　2.2.3 β-胡萝卜素的含量测定

　　在进行β-胡萝卜素的含量测定时采用分光光度法，分光光度法的关键是选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收，但可在一定条件在加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定。而β—胡萝卜素在可见光处其本身就对光有吸收，因此不需要加入显色剂就可以测定。

　　但是在本实验当中由于石油醚具有极大的挥发性，使得其所测量时浓度值发生改变而不准确，可根据β-胡萝卜素的的物理性质将石油醚换为其他不易挥发的溶剂作为改进。

　　2.2.4维生素B2荧光光度定量测定

　　由于核黄素是一种异咯嗪衍生物，其水及酒精的中性溶液为黄色，并且有很强的荧光，这种荧光在强酸和强碱中易被破坏，所以在所有操作过程中要避免核黄素受到阳光的直接照射。

　　实验所得曲线线性较好，结果较为理想，同时通过本实验掌握荧光光度计的使用。

　　3.结论

　　至此综上所述，该材料中粗脂肪的含量约为12.46%，维生素C的含量约为48 (μg/ml)，β-胡萝卜素的含量约为40.8%，维生素B2含量约为1.125 (μg/ml)。

===============================================The End=======================================

这次试验方法较为简单，分享出来有点不好意思，但是实验材料就是我们身边常见的树木，经过本次试验既加深了我对某几项实验技术的掌握，同时也对身边事物有了更深一层的了解，大家也可以将自己身边常见的东西拿来检测下哦~~没准从中就可以发现一些很有价值的东西呢！！！