主题:【讨论】关于基线不稳的问题

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有水有渝
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可能是含这个N,N-二甲基辛胺引起平衡时间久,楼主把这个去掉,其它的流动相成分和比例都不变看看能不能把基线走稳?
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2010/11/13 12:50:48 Last edit by xky0230699
AK-47(冲)
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ychunhai
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原文由 小景(xiaojingjojo) 发表:
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
楼主能不能把你的色谱条件说一下,流动相用的事先混合还是在线混合?


流动相用的是60:40的缓冲液和乙腈,缓冲液是0.9g磷酸二氢钠和4.8gN,N-二甲基辛胺用水溶解并定溶到1L,磷酸调PH=3.0,流动相事先混合好脱气的,脱了20-30min的气(Ps:这个流动相好像不太容易脱气,容易产生气泡)

不知你这方法是怎么来的,如果不是标准方法,很可能是流动相的问题。N,N-二甲基辛胺是有一条C10的烷基,这种物质和C18柱子保留肯定是很强的(C10和C18是很相似的,相似相溶,并且非极性很强,很洗脱下来)。这应该是离子对色谱,离子对色谱很难平衡,所以漂移比较大,第一天不能出峰,第二天色谱柱已经被流动相饱和了,出峰了。但是也不能完全洗脱,所有出现很多小峰。你这根色谱柱里面的流动相(N,N-二甲基辛胺)很难洗脱完全,以后很难用于测其他样品。
小景
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原文由 青林(wyqql2060) 发表:
楼主把实验条件再调下,加大有机相的比例试下


加大有机相比例有什么根据或具体原因吗?不太明白。。。
小景
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原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
可能是含这个N,N-二甲基辛胺引起平衡时间久,楼主把这个去掉,其它的流动相成分和比例都不变看看能不能把基线走稳?


我感觉也好像是这个试剂在作怪,但是药典里方法要求这样,也不能说去掉就去掉啊
小景
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原文由 ychunhai(ychunhai) 发表:
原文由 小景(xiaojingjojo) 发表:
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
楼主能不能把你的色谱条件说一下,流动相用的事先混合还是在线混合?


流动相用的是60:40的缓冲液和乙腈,缓冲液是0.9g磷酸二氢钠和4.8gN,N-二甲基辛胺用水溶解并定溶到1L,磷酸调PH=3.0,流动相事先混合好脱气的,脱了20-30min的气(Ps:这个流动相好像不太容易脱气,容易产生气泡)

不知你这方法是怎么来的,如果不是标准方法,很可能是流动相的问题。N,N-二甲基辛胺是有一条C10的烷基,这种物质和C18柱子保留肯定是很强的(C10和C18是很相似的,相似相溶,并且非极性很强,很洗脱下来)。这应该是离子对色谱,离子对色谱很难平衡,所以漂移比较大,第一天不能出峰,第二天色谱柱已经被流动相饱和了,出峰了。但是也不能完全洗脱,所有出现很多小峰。你这根色谱柱里面的流动相(N,N-二甲基辛胺)很难洗脱完全,以后很难用于测其他样品。


这个方法是中国药典里面的,你这么一说还真是有道理啊,解释得很合理,可是这样的话柱子不就麻烦了吗?用什么办法补救才好呢?
有水有渝
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原文由 小景(xiaojingjojo) 发表:
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
可能是含这个N,N-二甲基辛胺引起平衡时间久,楼主把这个去掉,其它的流动相成分和比例都不变看看能不能把基线走稳?


我感觉也好像是这个试剂在作怪,但是药典里方法要求这样,也不能说去掉就去掉啊


没要你在分析的时候真把这个去了,只是为了检验一下是不是这个试剂的原因,如果是的话换一瓶其它厂家最新生产的试试看。
ychunhai
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是药典的方法肯定是经过很严格的验证的成熟方法。但要注意几个方面:
    1.试剂有没有加错(主要是这个N,N-二甲基辛胺):包括错或变质的试剂、称量错误、稀释倍数错误。
2.C18之间有很大的不同。有的C18碳的履盖率特别大,就保留很强。所以难平衡。可考虑另一柱子:可用一简单的方法:用柱效测定液,相同的条件,保留时间短的对这个试剂保留应该弱一些。
3.这里面的缓冲液和乙腈的比例是可调的:这也是药典规定的----只要求你必须加入这二种组份(这种缓冲液和乙腈),但比例是可以调整的。有机相增加会加快平衡和洗脱。
ychunhai
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另外加热柱子可以加快平衡和洗脱。最高温度可到50℃(可以长时间使用的温度,但不同的柱子可能有些不同)。
chenzhengchun
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使用色谱纯试剂,试剂纯度不高会造成基线不稳,另外色谱柱原因也很大,用甲醇进行冲柱,查看柱压是否稳定,系统内有气泡也会出现这种现象,使用在线脱气机效果较好,还要杳看系统是否有泄漏,有的液相色谱泄漏出的液体汇入废液,不会被感应器杳觉,另外样品中含有大分子不明物质没有被洗出会出现基线飘移,千万不要叠氮化钠作水防腐剂,这东西造成基线噪声大。
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