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主题：【求助】物质测定 吸光值问题？请教大家！

浏览0 回复2 电梯直达
feixiang3152
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发表于：2010/11/29 14:47:44 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
大家好：
我最近在做蛋白质修饰率的测定。可是我每次做的结果都是未修饰和修饰过的在335nm处吸光值都非常低，大概在0.003或0.004。我采用的是TNBS法，具体如下：
1mL蛋白液（修饰蛋白和未修饰蛋白）+1mL4%碳酸氢钠+1mL0.1%TNBS，混匀后40°反应2h，再加入1mL10%SDS和0.5mL1N盐酸，在335nm处读取吸光值。修饰后蛋白质的吸光值/修饰前蛋白质的吸光值为残留氨基酸量。每次测定的结果都非常奇怪，那么低，我感觉不可信，根据原理应该是修饰后的吸光值小于修饰前的吸光值才合理啊。我也不知道吸光值应该在怎样的范围内正常？我们实验室没有人做过，请大家指点一下吧！哪里有问题呢？谢谢
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2010/11/29 18:56:58 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没做过蛋白分析，但看来你的方法有问题。如果试剂没有问题，看你的方法，参比液应该是蛋白空白处理液，是不是蛋白浓度太低了？建议你提高到10-50倍试试。
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这站不远
zhenduanye
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2010/11/29 19:57:38 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
335干扰应该比较大，要注意控制干扰
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