主题：【求助】液相色谱测定左旋肉碱甲醇超声提取问题？(详细内容见4楼)

不行的话换GCMS试下嘛。

在美国药典条件下，不提取，直接进左旋肉碱能做出来吗？

原文由 beijita45(beijita45) 发表:
液相色谱用氨基柱

如何用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱[/url]测定左旋肉碱含量测定?

用氨基柱,根据美国药典的做法根本就做不出来,请教各位同仁给点意见?
我是将左旋肉碱根据配方溶于咖啡中,前处理用甲醇超声提取,定容至100ml容量瓶中,过滤,即可

那美国药典有没有规定仪器和柱子？

美国标准如下
assay-

pH 4.5 Phosphate buffer(0.05M)- Dissolve 6.805g of monobasic potassium phosphate in1000ml of water.

Mobile phase -prepare a filtered and degassed mixture of acetonitrile and pH 4.5 phosphate buffer(0.05M)(65:35).adjust with phosphoric acid to a pH of 4.7,and mix.

翻译：取磷酸二氢钾6.805g 溶于1000水中，配成磷酸二氢钾溶液。 流动相：乙腈：磷酸二氢钾溶液（65：35），用磷酸调PH到4.7.

chromatographic system
chromatograph is equipped with a 205nm detector and a 3.9-mm*30-cm column that contains 10-um packing L8. the flow rate is maintained at about 1ml  per minute. then change the composition linearly over the next 20 minutes to a mixture of 65% acetonitrile and 35% water. elute 100ml of this mixture,then change the composition liinearly over th following 20 minutes to 100% mobile phase, and allow chromatography to proceed for about 3 hours.chromatograph the resolution solution, and record the peak responses as directed for procedure: the resolution, R,between crotonoylbetaine(levocarnitine related compound A)and levocarnitine is not less than 1.0

翻译：波长205nm，氨基柱3.9mm*30cm，L8，流速1.00ml/分钟，用乙睛洗脱50ml，乙腈：水（65：35）20分钟，然后用流动相平衡20分钟以上，整个过程3小时。

我改过：1。流动相乙腈：水（75：25），跑不出来。
2.PH调过2.5，峰是粘的，分不开。
3.现在怀疑是不是柱已经不能用了。柱的问题。
4.柱温也调过，不变。
关于用水溶还是用甲醇溶的问题，我已经试过对照品，没有任何问题，两种溶剂包括乙醇都用过，都可以跑出对照品，现在就是样品怎么出来。
关于为什么要提取，因为咖啡是过滤不了的，如果直接用水溶，柱就肯定很惨。咖啡不溶甲醇，所以直接用甲醇提取，过滤并进样。
关于用C18柱，也做过，不行，所查阅的文献资料不起任何作用。

205nm的吸收比较弱，会不会是你配置的浓度太小，检测不到？

波长如下
205nm——370nm都试过，无效，我的液相是waters。