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主题：反向C18色谱柱可以进酸性流动相吗？

浏览0 回复22 电梯直达
向日葵的忧伤
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发表于：2014/03/24 18:24:30 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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要分析的样品是弱有机酸类物质，流动相需要酸性，请问磷酸、乙酸、甲酸等，哪个适合做C18色谱柱的流动相，浓度或者pH值多少合适？
推荐答案：zhoujin83回复于2014/03/25
现在一般的C18色谱柱，能耐受的pH范围是2-8，也有范围更宽的，可以参照色谱柱说明书。所以流动相中添加磷酸、甲酸、乙酸什么的都没有任何问题，只要pH在耐受范围即可。但是，选择流动相添加剂也是有讲究的，比如你方法选用的波长是210nm，那么最好不要用甲酸乙酸，因为甲酸乙酸的截止波长大于210nm，会造成基线漂移严重；另外，如果你流动相的pH是4.0，那么不建议使用磷酸盐，因为磷酸盐/磷酸在pH4.0附近是没有缓冲能力的，流动相的pH很容易发生变化，导致出峰重现性差。
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2014/3/24 19:41:11 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
以前用ODS C18，流动相中还添加了少量三氟乙酸。
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小不董
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2014/3/24 20:00:52 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
甲酸和乙酸都是有机酸，样品中没这两酸？
现在的柱子一般都可以承受酸的，一般耐碱性弱点。
要考虑加了酸后，有机酸的吸收可能比较低，pH值多少才能使其分离好需要摸索。
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向日葵的忧伤
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2014/3/24 20:18:07 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 小不董(doxw0323) 发表:
甲酸和乙酸都是有机酸，样品中没这两酸？
现在的柱子一般都可以承受酸的，一般耐碱性弱点。

要考虑加了酸后，有机酸的吸收可能比较低，pH值多少才能使其分离好需要摸索。


样品是二萜类酸，应该用什么做流动相呢？但是柱子一般能承受多大浓度的酸呢？
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donglixian
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2014/3/24 21:30:28 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
酸性大写没事，我正常用5%硫酸冲柱
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lifesinger
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2014/3/24 21:58:15 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
今天C18用的流动相，其中的缓冲溶液PH是2.4的。
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向日葵的忧伤
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2014/3/25 8:31:44 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 donglixian(donglixian) 发表:
酸性大写没事，我正常用5%硫酸冲柱



但是最近单标总是出双峰，也用甲醇水洗过柱子，还是这样，是不是柱子出了问题？
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e_liang369
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2014/3/25 9:09:33 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
5%的硫酸也敢用来冲柱？
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yjq19851229
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2014/3/25 11:51:40 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
磷酸比较适合，缓冲溶液就好
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zhoujin83
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2014/3/25 12:14:09 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
现在一般的C18色谱柱，能耐受的pH范围是2-8，也有范围更宽的，可以参照色谱柱说明书。所以流动相中添加磷酸、甲酸、乙酸什么的都没有任何问题，只要pH在耐受范围即可。但是，选择流动相添加剂也是有讲究的，比如你方法选用的波长是210nm，那么最好不要用甲酸乙酸，因为甲酸乙酸的截止波长大于210nm，会造成基线漂移严重；另外，如果你流动相的pH是4.0，那么不建议使用磷酸盐，因为磷酸盐/磷酸在pH4.0附近是没有缓冲能力的，流动相的pH很容易发生变化，导致出峰重现性差。
该帖子作者被版主 zhaohua8011加 2积分， 2经验，加分理由：有道理，鼓励
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zhx_fs_ln
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2014/3/25 13:05:56 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
质谱方法上用甲酸挺多，也是C18，也可以用甲酸-甲酸铵缓冲体系
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