今天做感冒止咳糖浆中黄芩苷含量测定时碰到了难题
色谱条件:岛津10A的机子,N2000工作站,流动相是甲醇:水:磷酸(35:65:0.3),检测波长280nm,理论板不少于3000。
对照品配制:取黄芩苷对照品适量,加50%甲醇制成每1ml含15ug的溶液。
供试品制备:精密量取1ml,置50ml容量瓶中,加50%的甲醇至刻度,摇匀,过滤即得。 供和对各进10ul。
问题出现:第一针对照品,跑了一小时,没任何峰出现,就是基线。
第二针对照品,我把波长调到278,保留时间为22.998时出峰,不过峰形难看,而且理论板数只有600多。。。
第三针对照品,把波长调到276(因为之前我测黄芩药材黄芩苷含量时用的波长就是276),但保留时间变成31.082???理论板数同2针
第四针对照品,把波长调到279,保留时间为34.673??理论板数同2针
第五针对照品,把波长再调至276,保留时间为22.948??理论板数同2针
我昨天做了样品,系统应该是没问题的,对照品溶液也是新配的!!!
问题1:为什么按照药典标准的波长测定无任何峰出现(当然进样也没问题)?
问题2:为什么改变波长会造成保留时间改变这么多?
问题3:为什么柱效这么差?(我用的柱子才用2星期,而且之前所做的样品柱效都不错)
现在都没法做下去了,到底是哪些方面的问题???大家帮忙看看!!!