主题:【求助】做的酶柱子内壁涂层布不均匀而且内壁结合的酶一直掉

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wj36tc
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在下做的固定化胰蛋白酶涂层柱:先硅烷化,再用戊二醛将胰蛋白酶与内壁上的—NH2结合,再用NaCNH4还原得到所要的柱子。遇到的主要问题就是发现固定上的酶很容易掉下来,而且内壁涂层很不均匀,是一段一段的,就是一段有酶一段没有固定上酶,电泳时因为酶会掉下来,所以运行个4次左右柱子就会堵,很郁闷。。。求大虾帮忙。。。
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userwzy
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我认为,你可以考虑改善一下固定方法,不过梅固定我也没有做过,不能帮什么忙
poplar_yang
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you can try diisothiocyanate in stead of 戊二醛
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sunpengwjh
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原文由 poplar_yang(poplar_yang) 发表:
you can try diisothiocyanate in stead of 戊二醛

楼主的实验进展怎么样了?问题得到解决了么?
poplar_yang
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actually, no perfect  yet, because the link is difficult for big molecule like 胰蛋白酶 trypsin, especially the life of 固定化胰蛋白酶涂层柱, 胰蛋白酶 will be lose the activity if the condition change as pH, temperature, ionic force, etc.
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heguang
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楼主是如何判断固定的酶是一段一段的?
另外,毛细管容易堵的原因绝不是酶掉下来了,因为蛋白的分子实在是太小了(与毛细管内径相比),不会是酶掉下来堵了毛细管。
wj36tc
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楼主是如何判断固定的酶是一段一段的?
另外,毛细管容易堵的原因绝不是酶掉下来了,因为蛋白的分子实在是太小了(与毛细管内径相比),不会是酶掉下来堵了毛细管。

酶会堵的,因为毛细管内壁在前面的步骤中已经结合许多物质,内径小多了,所以蛋白还是会堵。。。
wj36tc
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谢谢指导。。。
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