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毛细管电泳（CE）
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主题：【求助】毛细管电泳在电进样的时候为什么老是断流？

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liranhongde
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发表于：2010/04/07 22:59:10 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
毛细管电泳在电进样的时候为什么老是断流？
我做的是大体积的电进样。条件如下：
Buffer：10mM 磷酸盐， 2%SDS，6.6%正丁醇，6%乙腈，0.8%乙酸乙酯
样品溶解在pH9的10mM硼酸盐中，浓度为10ppm
采用电进样，-15KV 进200秒
分析电压采用-20kV。
我遇到的情况有两种：一种是在电进样的过程中就出现了电流断流；一种是进样是还是有电流，但一加上分析电压后电流就没了。然后我冲了柱子之后管子还是能正常使用，然后用同一瓶样品再进就没问题了，但样品也不出峰了。而小体积进样时（如-15kv 10秒进样）就没有这个问题
而且我发现在电进样时，紫外信号的基线波动非常大，这是正常的吗？
求高人指点一二，我也是刚开始做

PS：之所以采用大体积的电进样是为了想做毛细管电泳的在线富集
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2010/4/8 8:13:57 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
把溶解样品的溶液和缓冲溶液换成一种性质的溶液在试试看！
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lting154
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2010/4/8 11:57:08 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
把进样电压调小，或者时间调短试试，这样电堆积很容易产生气泡导致断流的。
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cpudaxiao
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2010/4/10 11:23:37 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
缓冲液太复杂了，并且磷酸盐和硼砂遇到有机溶剂都很容易析出
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2010/4/13 14:02:31 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主的问题解决的怎么样了？有进展么？
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liranhongde
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2010/4/14 14:27:11 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:
楼主的问题解决的怎么样了？有进展么？

有一点进展了，在样品中加入了50%以上的乙腈，可以把进样时间大大增加，但还是会时不时的断流，不是很稳定。而且加入有机溶剂以后电流的变化非常大，对基线的影响也很大。
PS:  样品出峰后基线会马上下降一块，不知道是怎么回事（电流基本没什么变化）
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plf0717
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2010/4/15 18:32:26 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主乙腈的量优化一下看看效果吧，


样品溶剂中含乙腈的话具有富集进样的效果，我们实验室用过30%乙腈，效果不错。

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sunpengwjh
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2010/4/16 8:59:12 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 liranhongde(liranhongde) 发表:
原文由 sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:
楼主的问题解决的怎么样了？有进展么？

有一点进展了，在样品中加入了50%以上的乙腈，可以把进样时间大大增加，但还是会时不时的断流，不是很稳定。而且加入有机溶剂以后电流的变化非常大，对基线的影响也很大。
PS:  样品出峰后基线会马上下降一块，不知道是怎么回事（电流基本没什么变化）

缓冲溶液和溶解样品的溶液，保持一致了么？
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ramay_ren
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2010/4/16 9:37:57 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你可以在电动进样前，先注入一段水柱，这样子会增加你的进样量，不过水柱的长短需要调整
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