3 样品的前处理
其实所有检测方法的开发,最难的也是在样品前处理阶段。由于分光光度法的特殊性,不具有分离的功能,所以,只能在样品前处理阶段尽可能的处理掉对测定具有干扰的组分。在这里我介绍几种简单的消除干扰的方法。
3.1 利用干扰组分和待测组分性质的不同去除干扰组分
一般采用萃取等方法,利用干扰组分和待测组分溶解性的不同,将干扰组分从体系中分离出去,这是最简单最实用的方法。
3.2选择不具有干扰的波段进行测定
在3.1的方法不奏效的时候,确定在最大吸收波长处有干扰,可以选择避开最大吸收波长,而选择不具有干扰的波段进行测定。但这样将以牺牲灵敏度为代价。
3.3利用合理的参比进行消除
合理的参比溶液是消除基体影响的一个很好的方法。
3.3.1原理
当一束平行光通过均匀的液体介质时,光的一部分被吸收,一部分透过溶液,还有一部分被器皿表面反射.假设入射光强度为I0(其实我不喜欢这么表示,还要弄下标,麻烦,可是很多书上都这么些,哎,没办法),吸收光强度为Ia,透射光强度为It,反射光强度为Ir,
(其中a表示absorption吸收,t表示transmittance透射,r表示reflection反射,嘿嘿,方便记忆,还顺便学几个单词,写论文有用)
则I0=Ia+It+Ir (1)
在分析过程中,被测溶液和参比溶液一般是分别放在同样材料和厚度的吸收池中(地球人都知道,又废话了),让强度为I0的单色光分别通过两个吸收池,再测量透射光的强度.所以反射光的影响可以相互抵消.(但是又有新的问题了,如果这样的话,那以前的单光束仪器岂不一直存在着反射光的影响,这个问题我想发个帖子单独讨论)
所以(1)式就被简化了:
I0=Ia+It (2)
透射光的强度 It与入射光的强度I0之比称为透射比,用T表示,那么,又有公式出现了,不过很简单:
T=It/I0 (3)
当然还有T和A的公式,大家都知道,我这里就不说了.
以上说了半天,就为说明一个问题,参比可以消除由于吸收池壁及溶剂对入射光的反射和吸收带来的误差.
3.3.2参比溶液的原则
既然有这好处,那下来吸收池里装什么就成了问题的关键,有好多中情况,有的我试验过,有的由于条件限制没有试验,如果有不对的地方,别拍我啊.
3.3.2.1当试液和显色剂都没有颜色时,可以用去离子水作为参比溶液.
3.3.2.2当显色剂没有颜色,而被测试液中存在其他有色离子,可用不加显色剂的被测试液作为参比溶液.
3.3.2.1和3.3.2.2很常用,尤其是3.3.2.2.我当时做果酱中亚硝酸盐的时候就遇到过这个问题,当时也想了很多办法,活性炭脱色,过柱子,掩蔽等,最后还是觉得用参比比较好,有兴趣的可以参考一下我写的论文<<双光束分光光度法测定果酱中的亚硝酸盐>>,我会上传的.
3.3.2.3显色剂有颜色,可以选择不加试样溶液的试剂空白做参比.
3.3.2.4显色剂和试液都有颜色,可将一份试液加入掩蔽剂,将被测组分掩蔽起来,使之不再和显色剂作用,而显色剂及其他试剂均按试液测定方法加入,以此来做为参比溶液,这样就可以消除显色剂和一些共存组分的干扰.
3.3.2.5改变加入试剂的顺序,使被测组分不发生显色反应,可以此溶液作为参比溶液消除干扰.这个方法操作起来比较困难,我没试验过,因为我的显色剂一加进去就有颜色了.
3.3.3单光束分光光度计实现参比的方法
不知道这方法行不行,存在一定的问题,但是也有一定的参考价值.
制作一个参比溶液,用空白校完仪器后放入,测定其吸光度,然后在制作标准曲线和测定样品的时候,同时减去参比的吸光度.
例如,用空白校完仪器后,测定参比的吸光度为0.006,而样品测定吸光度为0.447,则带入标准曲线计算的实际吸光度为0.441.这样就扣除了参比对测定结果的影响.
3.4 固相萃取
现在用的比较火的一种前处理方式,这种方式能很好的消除干扰组分而很好的保留待测组分。其缺点的固定相的选择上存在一定的困难,而且成本相对较高。
3.5利用导数光谱消除干扰
这种方法在具有工作站的仪器上具有很大的优势,工作站带有导数处理功能,可以将干扰组分求导后进行消除。
以上是我所介绍的关于条件的选择,感谢zhouyuhu版主所做的指导,我是一个新人,希望以后和大家多请教和学习,谢谢。