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主题：【讨论】NGCE分离DNA,DNA吸附于内壁，怎办呢？

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katherine7
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发表于：2011/02/25 20:45:57 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用CE分离DNA已有一段时日，但结果还是出不来。DNA吸附于内壁，衍生荧光LIF检测，无样品峰，不知咋回事。请教，请教！
我用的毛细管：未涂层
选择的CE模式：含纤维素的NGCE

我怀疑，是不是所配的含纤维素的分离缓冲液粘性高，增加了DNA的吸附？
另外，目前我使用的纤维素中含有一些杂质，这些杂质是不是也会增加DNA的吸附呢？

不知该如何？
最主要的：我担心含高质量浓度纤维素的分离缓冲液，会不会堵塞毛细管柱？
                  若毛细管柱被堵塞，是不是反向冲洗柱子就可以解决呢，用NaOH冲？

期待支招！期待中……
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katherine7
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2011/2/28 14:44:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般来说，纤维素是可以防止DNA在毛细管内壁吸附的，但是要看使用的纤维素的分子量和浓度。
杂质的影响不大，进口试剂通常没问题。

以上信息，高手的指导，拿来分享。
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jcok123
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2011/3/11 11:07:21 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不知你分析的DNA是markers还是基因组DNA，若是marker 的话可以参考这篇文章看看 ，希望对你有帮助。祝好
Tetrabutylammonium phosphate-assisted separation of multiplex polymerase
chain reaction products in non-gel sieving capillary electrophoresis
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katherine7
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2011/3/15 20:28:04 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 jcok123(jcok123) 发表:
Tetrabutylammonium phosphate-assisted separation of multiplex polymerase
chain reaction products in non-gel sieving capillary electrophoresis

这篇文章很好，针对这篇文章，我之前给你发过站内信，有几个问题想咨询你，但貌似信在站内迷失了。
我目前在做Marker的分离，但出峰情况常不能重复。
不知你们是否有遇到这类问题，又是如何解决的？
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heguang
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2011/3/16 19:19:17 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 katherine7(katherine7) 发表:
原文由 jcok123(jcok123) 发表:
Tetrabutylammonium phosphate-assisted separation of multiplex polymerase
chain reaction products in non-gel sieving capillary electrophoresis

这篇文章很好，针对这篇文章，我之前给你发过站内信，有几个问题想咨询你，但貌似信在站内迷失了。
我目前在做Marker的分离，但出峰情况常不能重复。
不知你们是否有遇到这类问题，又是如何解决的？


DNA的动态涂层是很好做的。你的纤维素浓度在1%-10%都会有涂层效果，不会让DNA吸附。
你的问题应该是在检测上，肯定是没有检测到你的样品。你用的什么荧光染料？怎么染的DNA？
如果你有紫外检测器，你可以用紫外做一下检测，估计紫外上都能出峰了。
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katherine7
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2011/3/17 19:53:37 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 heguang(heguang) 发表:
[DNA的动态涂层是很好做的。你的纤维素浓度在1%-10%都会有涂层效果，不会让DNA吸附。
你的问题应该是在检测上，肯定是没有检测到你的样品。你用的什么荧光染料？怎么染的DNA？
如果你有紫外检测器，你可以用紫外做一下检测，估计紫外上都能出峰了。


已经可以检测到我的样品峰了，但并不是每次都可以。是因为重复性太差了吗？
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2011/4/28 8:25:20 Last edit by katherine7
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