主题：【讨论】beckman毛细管电泳进样问题

原文由 CEcret(v2812644) 发表:
当然不是这样了.进样的时候outlet置于缓冲瓶中，才能保证每次进样时你的inlet所受到的反压一致。如果你采用废液瓶，那么当废液瓶中存有液体时，你的反压就和一开始空废液瓶的时候不一样了。
所以，一般为了保证进样重现性，习惯是将outlet置于缓冲瓶中。并且由于进样的时候被样品区带挤出毛细管的也同样是缓冲，并不会对outlet的缓冲组成造成任何影响。

原文由 beyond1977(xsh6743) 发表:
确实由于进样前有缓冲液冲洗过程，进样时outlet置于缓冲液瓶中，对缓冲液应该是基本没有影响

原文由 wy20071722(wy20071722) 发表:
两种方法我都用过，我用的硼酸硼砂换缓冲液，看不出来区别！可能用其他粘度不同的溶液会有影响吧！工程师推荐的方法是置于缓冲液瓶。

原文由 wy20071722(wy20071722) 发表:
两种方法我都用过，我用的硼酸硼砂换缓冲液，看不出来区别！可能用其他粘度不同的溶液会有影响吧！工程师推荐的方法是置于缓冲液瓶。

原文由 nini2006(nini2006) 发表:
同意CEcret的说法，置于废液瓶中和置于buffer中反压是不同的。
进样的时候还是放在buffer中比较好，因为置于废液瓶中进样结束后在回到 buffer瓶的过程中outlet外面挂着的液滴有可能掉落造成少量空气进入毛细管内。即使不会有这样的情况出现，个人认为你这样的方式并不能让buffer使用的时间更长，因为在进样时候毛细管内充满的是干净的buffer，被压出来的也是干净的buffer，你不会进样时间太长导致样品充满整个毛细管并进入outlet的buffer瓶中吧？

原文由 nini2006(nini2006) 发表:
同意CEcret的说法，置于废液瓶中和置于buffer中反压是不同的。
进样的时候还是放在buffer中比较好，因为置于废液瓶中进样结束后在回到 buffer瓶的过程中outlet外面挂着的液滴有可能掉落造成少量空气进入毛细管内。即使不会有这样的情况出现，个人认为你这样的方式并不能让buffer使用的时间更长，因为在进样时候毛细管内充满的是干净的buffer，被压出来的也是干净的buffer，你不会进样时间太长导致样品充满整个毛细管并进入outlet的buffer瓶中吧？

原文由 wy20071722(wy20071722) 发表:
电泳 的 时候样品区带也会在毛细管中移动的，如果电泳时间较长，有可能导致样品区带进入buffer瓶。可以进行一个简单的实验，用紫外进样荧光样品（保证浓度和进样量），再把出口端fuffer瓶用于进样（或者反向冲洗+电压），看会不会有荧光物质。这时候是可以看到荧光峰的。我想插入buffer瓶主要是因为两端的液面高度差不多，保证没有什么压力差。而如果插入空瓶中，右端的毛细管出口端与左端的buffer液面是有高度差的（如果卡盒两段毛细管平齐，这个高度差一定会存在），导致毛细管中始终存在压力。
如果buffer瓶使用比较长的时间不更换，也会产生这种压力差。而如果使用比较大的buffer瓶，相同体积量的液体带来的高度变化比较小，可以使用更长时间。（仅从这一点考虑。）如果毛细管插入液面比较短，这个压力差其实会很小，如果远小于我们使用时施加的压力，结果上就看不出来差别。（具体压力可以以水为参考计算，但是我没有算过，从实验结果可以推断部分）
为什么说大部分时候看不出来差别，有时候也有问题，猜测是那个“有时候”毛细管太短，且毛细管插入液面较深。