主题:【求助】峰的重现性问题

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baiyunshan
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我用的是贝克曼的P/ACE MDQ系列毛细管电泳仪,在分析样品的时候,重复走同一个样品,保留时间重现性还行,就是那个峰高波动挺大的。我在重复走样之间是按照0.1M NaOH(3min),水(2min),缓冲液(2min)冲洗柱子的,为什么峰高重现性这么差呢?
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userwzy
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如果迁移时间重现性很好的话,那么柱子状态应该不错.相同样品连续6次运行,峰面积RSD是多少,保证样品时同一批次配置.?
你的灯用了多久了?是不是时间太长了,或者灯的质量就不好.
你的进样方式是什么?压力还是电动?
如果是压力进样,把进样位置换一下(最好里的远一点),同一位置用的时间太长,也不太好. 还有看盖子是不是老化了,或者不合适.
如果电动进样,每次更换新的样品.



baiyunshan
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原文由 userwzy(userwzy) 发表:
如果迁移时间重现性很好的话,那么柱子状态应该不错.相同样品连续6次运行,峰面积RSD是多少,保证样品时同一批次配置.?
你的灯用了多久了?是不是时间太长了,或者灯的质量就不好.
你的进样方式是什么?压力还是电动?
如果是压力进样,把进样位置换一下(最好里的远一点),同一位置用的时间太长,也不太好. 还有看盖子是不是老化了,或者不合适.
如果电动进样,每次更换新的样品.


峰高差别较大,峰宽差不多的。因为现在我还没有数据处理的软件,暂时不能具体的算出它的峰面积,只能大概的估计。我连续进样都是同一个样品。
我们仪器才刚买了2个月,应该不是灯的质量问题,
我的进样方式是压力进样,0.5psi 
关于进样位置我有点疑问,就是那个你说的同一位置用的时间太长不太好,这是什么原因?这会导致进样量发生变化吗?
userwzy
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你先换一下位置试试,至于为何同一位置长时间使用不好,这个不好说,自己想想吧,不过仪器才2个月,理论上是不应该的.
再说反正才2个月,问仪器公司,现在服务应该是免费的.
cpudaxiao
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把样品换成水试一下,其它条件不变。
如果以水为样品进样基线平稳的话,把冲洗条件中的0.1的碱冲洗去掉,延长缓冲液冲洗的时间到4min 。
样品遇到你的缓冲会洗出来吗?写出来帮你诊断一下!
popinjay
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我的Beckman毛细管系统最近也和你一样的问题,迁移时间很稳定,但峰面积重现性很差,同一样品RSD现在最高能达到20%,基线有时莫名上升或下降,我用的磷酸缓冲液,冲洗、平衡、换管都试过了也不起作用,咨询Beckman工程师,波长校正、检测窗清洗也没问题,估计是氘灯能量不够,已使用近4000小时,但基线噪声并不明显,与两年前的记录相比噪声没什么变化,氘灯能量检测图谱我看不懂也找不到资料(二极管数目40左右的光强count在40000以下,有时又只有5000,不明白),准备换新氘灯了,6000多买了个新的,希望换后能改善。我用的压力进样,不知道是不是压力也不准了,改天试试电动进样。
baiyunshan
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把样品换成水试一下,其它条件不变。
如果以水为样品进样基线平稳的话,把冲洗条件中的0.1的碱冲洗去掉,延长缓冲液冲洗的时间到4min 。
样品遇到你的缓冲会洗出来吗?写出来帮你诊断一下!

是绿原酸,现在我又碰到问题了,就是我用缓冲液溶解样品,电流值稳定但是峰顶处呈椭圆状,峰形不怎么好看
用水溶解样品的话 峰顶呈尖锐形 峰形好看 但是电流值却是先上升到一定值后再稳定
请问这个怎么解释呢?
sunpengwjh
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把样品换成水试一下,其它条件不变。
如果以水为样品进样基线平稳的话,把冲洗条件中的0.1的碱冲洗去掉,延长缓冲液冲洗的时间到4min 。
样品遇到你的缓冲会洗出来吗?写出来帮你诊断一下!

是绿原酸,现在我又碰到问题了,就是我用缓冲液溶解样品,电流值稳定但是峰顶处呈椭圆状,峰形不怎么好看
用水溶解样品的话 峰顶呈尖锐形 峰形好看 但是电流值却是先上升到一定值后再稳定
请问这个怎么解释呢?

用水溶解样品,和缓冲溶液的背景吸收不一样导致了有上飘逸或是向下飘逸的现象!根据你的描述可能是样品溶解在缓冲溶液中吸附比较严重!
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2010/6/10 8:00:51 Last edit by sunpengwjh
wwc58
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我用的是贝克曼的P/ACE MDQ系列毛细管电泳仪,在分析样品的时候,重复走同一个样品,保留时间重现性还行,就是那个峰高波动挺大的。我在重复走样之间是按照0.1M NaOH(3min),水(2min),缓冲液(2min)冲洗柱子的,为什么峰高重现性这么差呢?
cpudaxiao
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把样品换成水试一下,其它条件不变。
如果以水为样品进样基线平稳的话,把冲洗条件中的0.1的碱冲洗去掉,延长缓冲液冲洗的时间到4min 。
样品遇到你的缓冲会洗出来吗?写出来帮你诊断一下!

是绿原酸,现在我又碰到问题了,就是我用缓冲液溶解样品,电流值稳定但是峰顶处呈椭圆状,峰形不怎么好看
用水溶解样品的话 峰顶呈尖锐形 峰形好看 但是电流值却是先上升到一定值后再稳定
请问这个怎么解释呢?


用水做溶剂进样量大的时候电流会有一个上升的过程,因为水的电导小于缓冲液的,所以水峰迁出管子后电流会变大。
还是不知道你的缓冲液的组成,也不知道是否使用了添加剂,所以没办法判断!
mantening
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毛细管进样端口切割不平整,对峰面积的重现性也有一定的影响。
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