最近做
液相的标曲,翻出领导以前认证时做的曲线来对照一下.
仪器是AGILENT1100,二元泵,手动进样。
领导的做法:先配制一个500ug/ml的高浓度,再分别稀释成1ug/ml和5ug/ml,然后以1ug/ml的标样进样2ul、5ul、10ul和20ul,再以5ug/ml的标样进样10ul,那么就以2ng、5ng、10ng、20ng和50ng所对应的响应做成标准曲线。
我的做法:配制0.05ug/ml、0.1ug/ml、0.2ug/ml、0.5ug/ml和1.0ug/ml的标液进样,以前面5个浓度对响应做曲线。
结果对比:15种物质的混标,取其中一种物质的曲线来说,领导的:Y=39.96X+6.47,R2=0.992,其他十四种也基本如此。我的:y = 708.66x + 8.81
R2=0.9998,其他十四种R=1.
我觉得领导的做法有问题,但他说是一样的,没问题,大家觉得呢?如果你是评审老师你会让它通过吗?
发图片像灌水,还是删除其他的吧,留下的这张图比较有质感,大家可以接受吧,
言归正传,为什么第一种做法与第二种的曲线存在较大差异,我总结了几点,大家看看,有问题望大家指正
第一:手动进样,重现性不好,尤其在进2ul,5ul时。公司有几个同事做
液相,大家打针的方式有所不同,分三种:1,将针插入六通阀,推一下,半秒钟后,再推一下,再半秒后再推一下,直至推完。2,将针插入六通阀后,轻轻一推,收工。3,将针插入六通阀后,猛的一推。同一样品,三人依次进同样体积,得到的响应还是有点差异的。第3种推法,响应最高,但我想,无论你用哪种推法,保证重现性才是最终目的。所以我选第2种,轻轻一推,匀速推进,尽量使每次力道相同。
第二:进不同体积引起更大误差,这个观点大家都认同。
第三:以绝对质量对响应做曲线,很多资料都不提倡计算绝对质量,这会引起更大误差,也许跟这里的曲线不好无关,但跟定量误差会有很大关系。
第四:对
液相进样装置六通阀的误解,尤其是做过
气相的人。他们会认为我打多少体积的液体进去,就是多少,不同的体积与响应会成线性,理论上
气相是这样,但到
液相这里就不是这样了。论坛上有几个帖子|HPLC六通阀进样器的使用及保养,相信大家都看过,进样20ul,实际只打进了75%也就15ul的液体,进其它体积是不是也只有75%就难说了,不过各厂家的阀不同,但也基本如此。如你想真正进20ul,就不得不大体积进样,这跟液体的物理知识有关。所以说不同体积是难成线性的。
所以说如果我是评审老师,那么我肯定要开不符合项或者是严重缺陷。