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主题：【分享】组织库冷冻样本管理流程推荐

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发表于：2011/04/23 09:54:01 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一． 取材和编号/标签部分
    在本环节进行组织和血液的取材，并制作条形码标签，将样本进行分装。

1. 取材单：手术医生根据临床病例情况在术前一日通知样本库次日取样本，同时在医嘱中注明需要抽取血样数量、种类。样本库根据次日样本情况预先准备样本提取单，并预先定义好流水编号。样本提取单上的信息可包含并不仅限于以下内容中的一部分：
A. 个体流水编号
B. 个体基本信息：如住院号，病理号，手术科室，手术医生，病人姓名，性别等
C. 样本特征信息：如脏器名称，样本类型（肿瘤，癌旁，正常，淋巴结，息肉，囊壁），样本性质（原发/复发/转移）等
D. 样本采集信息：如样本份量，体积，分管数，术前/术后等
E. 诊断信息：如临床诊断，病理诊断，分化程度，UICC 分期，ICD10/ICDO-3 代码等
F. 治疗信息：如放疗，化疗，手术等
G. 生物安全信息：有/无传染性
H. 时间信息：采集时间，样本离体时间，低温时间，等
I. 工作人员信息：取材员，记录员等
J. 以及备注信息。

2. 组织样本：从手术室收集组织样本，填写取材表。在组织库冻存管理软件上登记部分栏目，如通过输入住院号码，软件从HIS 中自动调入该病例的个体信息（基本信息、临床信息等）。
如果输入部分信息，由系统自动生成连续于上次的个体编号，如选择脏器名，样本类型，样本保存方式，以及分管数，软件按照规则生成样本编号，如1012345D19TF1~1012345D19TF4，在对应的样本信息栏中输入各分管的样本采集信息等特性，点击保存将所有信息存入数据库，同时自动在手术室的耐液氮的条形码标签上生成样本条形码信息。将离体的组织样本存入耐液氮冻存管，贴好标签后，在30分钟内浸入液氮。当天样本采集完成后，使用小型液氮转移罐或者冰盒将样本转移到实验室。
【组织样本的编号命名1012345D19TF1，代表该1012345 号病收集的D19 脏器的癌旁样本（T
肿瘤，P 癌旁，N 正常，L 淋巴结，Y 息肉，C 囊壁）用F 方式（Frozen Tissues/OCT/
RNAlater/DNA/Paraffin embedding 等）保存的第一份。】
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2011/4/23 9:54:31 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
3. 血液样本：各科室分别将血液样本送样本库，附血液取材表，填写取材表信息，取材表上分管数留空。按不同原发病灶脏器名称，对样本和取材单归类，每类按序排放。

a.打印标签：通过输入住院号将个体信息导入组织库冻存管理软件，之后将取材单上的流水编号和脏器名称输入软件，同时输入不同成份对应的预设管数，按照规则自动生成样本编号，如1012345D19BP1～1012345D19BP5，自动在实验室的条码打印机上生成耐-80 度标签。

b. 将标签贴到EP 管上，按序在离心管架上排好。

c. 将血液样本进行离心分血处理，对每种成份按预设的分管数分装成若干份，存入预先排好的离心管，存入时核对一下编号。
【以上方法为先贴标签再分血的程序，也可以考虑先分管再贴标签，流程如下：将血样样本进行离心分血处理，按需对不同成份存入EP管，按样本类型排序放好，在EP管盖上手工写上取材表上的个体流水号，同时在取材单上登记不同成份样本的确切分管数。完成后，根据取材单上的信息，通过软件输入相关信息，按照规则自动生成耐-80 度的条形码标签。按顺序将整批离心管贴好标签，再送-80 度冻存。】
【血液样本的编号命名1012345D19BP1，代表该1012345 号病收集的D19 脏器癌症的B 血液
样本的P 血浆（Plasma/ Serum / White Blood Cells/ Erythrocyte/ Thrombolytic / DNA/ RNA/whole Blood/等）的第一份。】
注：如今后存储细胞混悬液、分泌物、排泄物等类型样本时，编号规则参考附表2。
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2011/4/23 9:55:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
二． 样本入库部分
    在本环节将条码冻存管按照预先分配的位置信息存入条码冻存盒。通过对冻存管条形码的扫描，实现软件上的同步存入。
4.在-80度卧式冰箱里进行样本分类整理，按不同脏器将条码冻存管存入条码冻存盒，存入时通过对条码的扫描，确定冻存管和冻存盒之间的位置关系，实现软件上的同步信息定位。将冻存盒存入-80 度卧式冰箱的对应位置时，也通过对冻存盒条形码的扫描在软件上实现同步存入。
建议按照原发脏器名称进行样本归类存储，每个冻存盒内装同一种脏器同一种类型的样本，不同类型的样本存入不同颜色的冻存盒（如分成血清，血浆，白细胞，冷冻组织，RNALATER，细胞组学）。
为更便于使用，并且减少使用时的冻融次数，建议同一脏器同一类型样本的不同份数，存入不同的冻存盒。
建议预先规划冻存盒的存放位置，在冻存盒放入卧式整理冰箱之前，已经预先贴好了标签，其中包含脏器名称，样本类型和位置编号。等冻存盒存满后，可另贴一个标签注明内部的冻存管的流水编号起止。
5. 在卧式整理冰箱里任一病种的冻存盒存满后，转移到预先规划好位置的供长期存储的立式-80度超低温冰箱（如不同层架规划给不同的脏器），将冻存盒进行转移的时候，通过对冻存盒条形码的扫描，实现软件上的同步的位置搬移。

三． 信息关联部分
6. 样本的个体信息关联导入：
    样本的个体信息，可以在以上第2 第3 点制作标签的环节通过HIS 关联直接导入。如果无法实现HIS 接口的导入，可以通过定期用EXCEL 格式转导入。
  通过住院号或者病理号，从医院信息系统（HIS）里将样本个体来源对应的信息（基本信息，病史，病程，诊断信息，病理信息，检验信息，治疗信息，电子病例信息等）以 “.xls” (EXCEL文件格式)导出，然后将相关信息导入到冻存管理软件，通过住院号将冻存管上的编号和样本个体来源的信息进行关联。
7. 将样本的后期管理信息录入系统。可通过直接登记或者接口导入的方法，在冻存管理软件上录入样本的关联信息，如治疗结果，家系资料，流行病学资料，随访资料等。
8. 组织/血液样本的匹配：在冻存管理系统中设置关联栏目，如就诊卡号，住院号或身份证号等，如果某例样本既有血液又有组织，则系统自动匹配样本，建立信息关联并提示匹配样本数量。
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2011/4/23 9:55:30 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
四． 出库管理和日常操作部分

9. 样本的使用和管理中的几个细节
1) 通过冻存管理软件，进行各种预定条件的查询，统计，分析和出入库管理。
2) 在冰箱中的样本盒内空位较多时，计算机主界面上用不同颜色显示对应冻存盒的存储空置情况，可对对应冻存盒进行并位管理，整理出空的位置可供新的样本存入。
3) 出库时，通过条形码扫描实现快速信息处理。
4)设立账号层级权限，对样本设置重要性权限级别，对样本的某些信息字段也设置权限级别。权限除了操作功能限定，还和样本重要性级别挂钩。例如：现场取材账户只能制作标签和录入取材基本信息；样本管理人员可以查询样本的信息并进行入库操作，也可执行出库，；样本库主管账号可统计分析样本库信息，并审批出库；授权的访问账号可以查询得知库内现有的符合某些对应基本信息的样本数量，或者看到样本基本信息，却无法看到姓名等隐私字段。

10. 样本库标识建议
在冰箱外门上贴上磁性冻存架模拟标识，并在对应的空格位置上填写冻存盒的信息。例如冻存盒内样本名称，冻存盒编号，冻存盒内样本编号起止等。
这样，在打开冰箱门之前，对内部的样本基本情况也能一目了然。
注：【根据某些样本最终的实验要求，可能需要设计不同的存储流程，比如有些需要做蛋白实验的样
本，直接存入液氮罐或者-150 度冰箱保存，不经过整理冰箱这个环节；又比如对需要做细胞和组织培养的样本，为保证样本的质量，需要先存入-40 度冰箱后再转入-80 再存入-150 度超低温冰箱，或者采用程序冷冻仪进行冷冻】
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2011/4/23 9:56:12 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
五． 样本保存图示说明
A. 组织编号规则和标签



B. 外周血编号规则和标签



标签类型：BRADY THT-163-499-3-IP 长方形为25.4mm*9.525mm, 圆直径9.525mm
C．标签说明：以上方案设计中，条码打印机和标签使用美国的BRADY 产品，标签建议使用THT-163-499，该标签可以适用－196度。标签长方部分可打印条形码和编号，单位logo，以及若干条样本的信息项（如脏器名称，ICDO-3编号，样本类型，采集日期等），可贴于冻存管和离心管的侧壁，标签的圆点部分可以打印流水号、脏器名称和采集日期，可贴于冻存管和离心管的顶盖部分，以便于核对。
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2011/4/23 9:56:47 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
D. 冻存管/离心管贴了条码标签后的情况如下:



E. 在冻存盒上贴上标签，并注明冻存盒的位置编号。



F. 按照样本类型，进行冻存盒分色存放



G. 同一脏器同一类型样本不同份分入不同冻存盒存放，同一脏器不同类型分成不同颜色冻存盒，同一脏器所有盒子存入同一冻存架，在样本处理室内的卧式超低温冰箱里整理，某一盒存满后，再转移入样本储存室的大型立式超低温冰箱。



H. 立式超低温冰箱按照不同脏器，预先规划位置。
所有放到卧式冰箱里整理的冻存盒上，已经预先贴好了标签，标签上包含这个冻存盒最终将存入超低温冰箱的位置信息。

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2011/4/23 9:57:19 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一． 组织库冷冻保存管的常见形态与保存温度。
组织：冻存管保存（以内旋冻存管为多），常保存于-80 度/-150 度冰箱或液氮，也有很多单位将部分组织以RNAlater 浸润后保存于-30 度或-80度条件，此外也有OCT 包埋，蜡块等组织保存形态。在条件允许的情况下，尽量保留T/P/N 三种形态的样本。
推荐用内旋冻存管，一组TPN 保留于-150 度冰箱，两组TPN 保留于-80 度冰箱，一组TPN 保留于RNAlater
血液：冻存管或离心管保存，常保存于-80 度条件下。
血液应进行分离，并以血液组分的形式单独保存，常见保存的有血浆，血清，白细胞，也有保存红细胞，血沉棕黄层的，也有分离出淋巴细胞保存的。推荐用0.5ml 离心管保存5 份血清，5 份血浆，1~2份淋巴细胞从样本管的容积上看，越来越有细分化的趋势，这一趋势也是为了最大化地方便样本使用和改善样本质量（减少冻融次数），目前常规都存储在0.5-2ml 的样本管内。



二．组织库冻存盒的常见形态
    冻存盒是存放样本管的最基础容器，选择好冻存盒，可以给存储样本带来方便，也可以合理利用冰箱存储空间，所以显得重要。
    由于目前主流超低温冰箱/液氮罐的内空间设计，都是以2 英寸冻存盒为基准设计的，所以选择的冻存盒尺寸应尽量采用标准尺寸：132*132*52。
    在满足该尺寸的条件下，有两种规格的冻存盒，一种为9*9，一种为10*10。9*9 规格最为常见，适用于各品牌各种规格的1.5-2ml样本管。而10*10 仅适用于某些品牌的内旋2ml 冻存管，以及部分特制的1.5ml 外旋冻存管。在选择冻存盒的时候需要注意该点。0.5ml离心管对应的冻存盒，10*10 规格的情况下，长宽尺寸和标准2ml 冻存盒相同，高度可以减小到2/3以增加内冻存盒容量。从冻存盒材料上看，市场上主要有纸质，PP，PC 几种材料。PC 塑料冻存盒能兼容冰箱和液氮罐，可惜成本太高，PP塑料冻存盒在液氮条件下会脆裂，纸质冻存盒能适用液氮，不过在应用于液氮液相时需要预先打孔。
    常规纸质冻存盒不防水，XX公司专利的翻盖型冻存盒既解决了防水问题，又解决了编号定位问题，翻盖设计还解决了低温条件下开盖困难的问题，是目前制作最好的纸质冻存盒。目前国内大型组织生物样本库都使用了该类型冻存盒。

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2011/4/23 9:58:48 Last edit by 7336167
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2011/4/23 9:57:59 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
三．冰箱内存放冻存架冻存盒的常见形态
1. 立式超低温冰箱内放置冻存架的方法
2．立式冻存架内放置冻存盒的方法：




3. 卧式低温冰箱存放冻存盒的情况



4. 冻存架的选择：
    常规的不锈钢冻存架，按材料分，有SUS-304 或SUS-201 的0.4-1.0mm 厚度不锈钢材料制作，类型分，有抽屉型冻存架和框式冻存架。因为不锈钢材料和工艺的不同，所以价格差距比较大。
Avantech 品牌CryoMaxTM 系列冻存架，全部采用SUS-304 有3 种系列，覆盖各种需求。
    IR 常规系列冻存架采用和进口冻存架同等的模具，使用0.75mm 厚度SUS-304 不锈钢使用冲模将背板一次冲压翻边成型，是目前国内制作最好的冻存架。
    IR-CN 系列冻存架采用0.4mm 厚度SUS-304 不锈钢，对切口做翻边处理，是实惠型的轻质冻存架，比市场上常见的SUS-201 制作的冻存架更耐腐蚀。
    IR-D 系列冻存架是采用0.4mm-1.0mm 多种材料混合制作的抽屉型冻存架。
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2011/4/23 9:59:38 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
四． 超低温冰箱的考虑因素
1． 冰箱类型。
  超低温冰箱有立式和卧式之分，温度有-80 度和-150 度。目前市面上-150度冰箱都是卧式。卧式冰箱优点是开门冷气散发较小，缺点是占地面积大，立式冰箱正好相反。所以大规模建库的情况下，推荐使用立式冰箱做大规模存储，而卧式冰箱做经常开关门的整理冰箱用。
2． 面积规划。
    由于建组织库，冰箱会越来越多，所以选择冰箱的时候需要规划单样本的占地面积事宜。有三个因素会与此有关
A. 冰箱保温发泡材料：采用VIP 发泡技术的冰箱对建库来说显得更有优势，该技术将140mm 厚的外壁降低到70mm 厚，使得冰箱占地面积大大缩小。
B. 冰箱容量越大，单标本占地面积越小。
C. 内部空间设计越紧凑，单标本占地面积越小。
    根据以上3 个因素，目前全球单标本占地面积最小的是S 品牌的MDF-U73V。其在0.9 平方不到的空间内可放置528 个标准冻存盒。比同类型的其余品牌单样本占地面积小约30%
3． 用电和成本因素。
    由于 500 升的冰箱和700 升的冰箱，耗电几乎是一致的，所以对于单标本的耗电量来说，大容量的冰箱比较划算。从成本上算，大容量冰箱的单样本平摊设备成本会比小容量冰箱要低，同时，10 年的耗电量也低。
4． 安全保护装置。
    冰箱的安全保护涉及四个内容：1 是断电时的保护 2 是断电后重新恢复电力时的保护3 是运行期间的稳压保护4 是使用机制
1)断电条件下的保护一般有两种方式：A. UPS B. LCO2/LN2 辅助冷却装置UPS当前成本较高，并没有大规模使用。若干年后可能会有一种UPS 方式是夜间给UPS充电，白天UPS给设备供电，利用电价峰谷差进行，根据目前的UPS 和用电成本，该方式从经济效应上来说是不合算的。
    CO2/LN2辅助冷却装置又叫后备制冷系统（BACKUPSYSTEM），采用一种在冰箱内温度上升时，机械感温装置触动电磁阀的开启，向冰箱内注入液态CO2/液态N2的辅助冷却方式。辅助冷却系统在设备故障或者断电情况下可维持10 小时左右，具体时长根据设置温度和钢瓶容量会有所不同， CO2辅助冷却适用于-80 冰箱，一般情况下可使箱内维持在-65~-70 度左右，而LN2 适用于-150 度超低温冰箱，能使箱内维持在-130度以下。CO2辅助冷却装置使用带虹吸管的液态CO2 钢瓶，LN2 辅助冷却装置使用自增压的液氮罐，该液氮罐会有LN2 的自然损耗。
2) 断电后重新恢复电力的时候，由于冰箱压缩机的启动电流较大，所以一批冰箱同时重启的时候，会对电力负荷造成二次冲击，所以需要对每台冰箱设置不同的延时启动。目前市场上有冰箱是自带延时启动设置功能的。
3) 在电压不稳定的地区，需要使用稳压保护装置
4) 使用机制方面，涉及挂锁，电子密码锁，冰箱温度监控报警系统，样品室门禁监控系统，样品信息安全机制等。
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5．冰箱的推荐
常见冻存盒保存样品管情况对照表

型号类型 内部分格 尺寸mm 适用冷冻管
IRBOX-2081 上下盖型 9*9 132×132×52 所有品牌1.5-2.0ml 内外旋冻存管，1.5ml 各品牌EP管
IRBOX-2281 翻盖型 9*9 132×132×52
IRBOX-2100 翻盖型 10*10 134×134×52 所有品牌1.8-2.0ml 内旋冻存管，
AVANTEH 牌1.6ml 外旋冻存管OCT-160S，
Nalgene 牌1.0ml 外旋冻存管
IRBOX-1100 翻盖型 10*10 132×132×35 0.5-0.6ml 各品牌EP 管


推荐最适用于建库的冰箱：三洋MDF-U73V
三洋 MDF-U73V 堆放冻存架的情况
（推荐建库使用该冰箱，VIP 发泡和紧凑式设计使得该型号的单样本占地面积全球最小）：
第一层配 6 个IR-220、第二层配 6 个IR-224
第三层配 6 个IR-220、第四层配 6 个IR-224
冻存架内放置冻存盒的情况
IR-220 可放置20 个标准2 英寸冻存盒
IR-224 可放置24 个标准2 英寸冻存盒

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五. 立式/卧式冰箱和液氮罐的定位编号规则建议



一个标本的位置信息会用AA-BB-CC-DD 表达，
其中 AA 为冰箱编号
BB 为冰箱内冻存架排列的行和列编号
CC 为冻存架内冻存盒排列的行和列编号
DD 为冻存盒内的位置编号
2.卧式冰箱
卧式冰箱的标本位置信息也采用类似于立式冰箱的方式，区别是卧式冰箱里
的冻存架的高度是用方框内的格子表达的。请参考如下：



3. 液氮灌

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