5L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗? 答:L-谷氨酰胺在细胞培养时非常重要的。脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,降解率随保存温度而变。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。 6培养细胞生长减慢的原因有哪些?其解决办法有哪些? 答:可能得原因有:更换了不同的培养液或血清;培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子等耗尽或缺乏或已被破坏;培养物中有少量细菌或真菌污染;试剂保存不当;比较新培养液与原培养液成分,比较新血清与旧血清支持细胞生长实验找出可能的原因。 解决办法:增加起始培养细胞浓度;让细胞逐渐适应新培养液;换入新鲜配制培养液;补加谷氨酰胺或生长因子等;用无抗生素培养液培养,如发现污染,丢弃培养物,或用抗生素除菌;血清需保存在-5℃到-20℃;培养液需在2-8℃避光保存;含血清完全培养液在2-8℃保存,并在2周内用完;分离培养物,检测支原体。 |
1、HEPES在细胞培养过程中起什么作用? 答:HEPES溶液:是一种弱酸,中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸,主要作用是防止培养基pH迅速变化。在开放式培养条件下,培养基脱离了5%CO2的环境,CO2气体迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此时可以维持pH7.0左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。 2、什么是无血清培养基?与普通培养基有什么区别? 答:无血清培养基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。基本成分包括基础培养基及添加组分两大部分。添加组分可能包括纤连蛋白、层粘连蛋白等贴壁因子、胰岛素、转铁蛋白、硒等。 3、细胞体内外培养的差别是什么? 答:细胞离体后,失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响,生活在缺乏动态平衡相对稳定的环境中,日久天长,易发生如下变化:分化现象减弱;形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡;或发生转化获得不死性,变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此,培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体,它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能,也有一些不同于体内细胞的性状。实际上细胞一旦被置于体外培养后,这种差异就开始发生了。 4、二倍体细胞有什么特点? 答:二倍体细胞的染色体组型是2n核型;贴壁依赖接触抑制;一般可传代培养50代;无致瘤性。如W1-38:正常胚肺组织人二倍体细胞系。MRC-5:从正常男性肺组织中获得的人二倍体细胞系。 |