主题:【求助】请教用质谱的方法进行DNA点突变的分析

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xxqu0516
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大家好

最近在做DNA点突变的研究,由于基因很大,有七十几个外显子,如果一一扩增测序的话成本和时间上都不划算.

所以在考虑能否用质谱的方法,或者其他什么分析的方法先进行下初筛。

和标样比较,如果看到了某个峰有异常的话,再专门扩增这个外显子去测序

外显子一般200-300bp。

想请教大家,不知道用质谱的方法可不可以?另外,国内有哪里用质谱进行DNA序列的研究的吗?

我知道用MALDI-TOF-TOF这个进行SNP的研究,但是对于我们这个200-300bp来说量程上就太小了。

期待大家的回答~~~~
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去年冬天
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国内有哪里用质谱进行DNA序列的研究的吗?
复旦大学有这方面的研究。
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xxqu0516
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原文由 去年冬天(7336167) 发表:
国内有哪里用质谱进行DNA序列的研究的吗?
复旦大学有这方面的研究。


谢谢您的回复~~ 不知道具体是复旦哪里呢?

另外这种方法到底可行吗?没有人做过这方面的尝试吗?
去年冬天
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原文由 xxqu0516(xxqu0516) 发表:
原文由 去年冬天(7336167) 发表:
国内有哪里用质谱进行DNA序列的研究的吗?
复旦大学有这方面的研究。


谢谢您的回复~~ 不知道具体是复旦哪里呢?

另外这种方法到底可行吗?没有人做过这方面的尝试吗?


http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110525/3326550/
可看看上面资料。
monod
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原文由 xxqu0516(xxqu0516) 发表:
大家好

最近在做DNA点突变的研究,由于基因很大,有七十几个外显子,如果一一扩增测序的话成本和时间上都不划算.

所以在考虑能否用质谱的方法,或者其他什么分析的方法先进行下初筛。

和标样比较,如果看到了某个峰有异常的话,再专门扩增这个外显子去测序

外显子一般200-300bp。

想请教大家,不知道用质谱的方法可不可以?另外,国内有哪里用质谱进行DNA序列的研究的吗?

我知道用MALDI-TOF-TOF这个进行SNP的研究,但是对于我们这个200-300bp来说量程上就太小了。

期待大家的回答~~~~


查下相关文献就知道大致哪些人在做了。应该还是蛮多的。不过这个分子量太大了,8k以下还可以试着做。可以考虑在其他的平台上尝试下。和ABI(不是AB Sciex)联系下看看。
maldiguy
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如果只想找SNP位点,一般的MALDI-TOF就可以了
现在sequenom在国内推广得不错
其他MALDI-TOF平台也可以做,但数据分析上有麻烦
但200个BP,分子量60k以上,做起来就麻烦了
xxqu0516
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原文由 monod(monod) 发表:
原文由 xxqu0516(xxqu0516) 发表:
大家好

最近在做DNA点突变的研究,由于基因很大,有七十几个外显子,如果一一扩增测序的话成本和时间上都不划算.

所以在考虑能否用质谱的方法,或者其他什么分析的方法先进行下初筛。

和标样比较,如果看到了某个峰有异常的话,再专门扩增这个外显子去测序

外显子一般200-300bp。

想请教大家,不知道用质谱的方法可不可以?另外,国内有哪里用质谱进行DNA序列的研究的吗?

我知道用MALDI-TOF-TOF这个进行SNP的研究,但是对于我们这个200-300bp来说量程上就太小了。

期待大家的回答~~~~


查下相关文献就知道大致哪些人在做了。应该还是蛮多的。不过这个分子量太大了,8k以下还可以试着做。可以考虑在其他的平台上尝试下。和ABI(不是AB Sciex)联系下看看。


对于ESI-FTICR模式呢?我看了文献貌似是可以的

另外,请问对于核酸来讲,质荷比怎么计算呢?LC-MS的量程在2000一下,我们可否多加些电荷而达到量程要求呢?
附件中有两篇这方面的文章,不知道哪位有兴趣帮我再探讨探讨~~~
xxqu0516
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原文由 maldiguy(maldiguy) 发表:
如果只想找SNP位点,一般的MALDI-TOF就可以了
现在sequenom在国内推广得不错
其他MALDI-TOF平台也可以做,但数据分析上有麻烦
但200个BP,分子量60k以上,做起来就麻烦了


我们不是找SNP,是找未知的点突变,所以Sequenom貌似是不可以的
听说LC-MS可以试试,理论上讲是可以的,但是操作起来貌似还有些问题......
maldiguy
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LC-MS除盐太难了(PCR反应用到很高浓度的盐,对质谱很高)
而且PCR产物在一般C18柱上保留很差,需要用三乙胺或者其他离子对试剂等来增加保留时间,这些东西的存在,会影响核酸的电离
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