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| 项目 | 检查情况 | 整改情况 |
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| 接种后的平板标识不统一，培养后出结果时易混淆样品、检测项目。 微生物大肠菌群检测时，未对培养基、稀释液进行空白对照；盐水未做菌落总数的空白对照实验。 超净台空气净度放置时间为15分钟 微生物接种培养不做平行样。 稀释样品的混匀方法不正确。 实验时，吸管尖破损的继续使用，吸样管口破损，使移取液体不准确 试管手持方式不正确，看不到液面；拿两只试管时，管口互相接触。 吸管中吸入样品后在酒精灯火焰上停留，会将样品中微生物杀死 | 超净台空气净度从操作开始至操作结束。 大肠菌群实验也应同时做大肠培养基、盐水的空白实验。
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| 从操作开始到倾注平板的时间较长（接种后不能及时加入培养基）。 倾注平板时琼脂温度低，倒至底部已凝结。 | 从操作开始应20分钟倾注一次平板。 |
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| 原料奶细菌总数稀释度选择不当，两个稀释度菌落数生长均较多 大肠菌群检测第一步和第二步后出具判定结果，不进行第三步的验证实验。 |
| 结果报告错误： 固体原料、吸管菌落总数报告为<1cfu/ml， 琼脂空白结果为零报告为<1。 空白结果记录在稀释度为10-3下。 超净台内环境监测结果未做记录。 微生物原始记录内容填写不规范： 例原料B031记录于涂抹、空气降落一栏下，未注明检测项目，只记录1个10倍稀释度；过程记录为600/620，结果报告为6.1×102，无结果单位（过程数据已乘以10，还是结果报告错误？） 原料奶940号细菌总数万倍稀释后平板菌落记录为80/1200，结果报告为9.0×105 微生物原始记录中，涂抹的单位为个/平皿、大肠菌群单位为个/ml。 技术文件中涂抹细菌总数的单位为cfu/平皿。应为cfu/cm2 |
| 微生物接种时，手持两只试管，管口、塞子相接触；瓶塞放于台面、再用。 操作时吸管超出工作台，拔塞时在超净台出风口进行 吸管用后直接放于超净台上。 |
| 琼脂、试管等只盖胶塞、未用厚纸包扎，灭菌后直接暴露在空气中。 | 微生物所用器皿均应盖胶塞后用厚纸包扎。 | |
| 微生物室灭菌后人员出入频繁，且不能及时关门。 微生物操作间专用工衣、工鞋、工帽配备不齐全。 微生物室安装的紫外灭菌灯高度偏高,灭菌效果的验证做规定。 培养箱未定期使用擦拭消毒。 微生物室、缓冲间未定期进行环境监测。 | 微生物室、缓冲间应定期进行环境监测，以检查灭菌效果。 | |
| 培养基使用500ml三角瓶配制，内装400ml培养基。 营养琼脂使用500ml三角瓶配制量为500ml，可能造成灭菌不彻底。 | 培养基的配制量不能超过容器的2/3；建议培养基用300ml三角瓶高压灭菌，保证灭菌效果 |
| 项 目 | 问 题 |
| 高压锅灭菌结束、压力降未降下即打开高压锅 | |
| 显微镜使用、维护不够正确 | |
| 人员进入无菌室时，未及时更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋；中间出室外时，也未换掉消毒过的工作服、工作帽及工作鞋 | |
| 芽孢总数 | 不清楚紫外灯对环境的消毒时间 -1 样品检测前未混匀 -1 样品容器打开前未进行消毒（酒精擦拭、瓶口未过火焰）-1 试管、琼脂瓶口在拔塞前未过火焰 -1 稀释时所加样品量不准确（加样时洒出、使用试管破损严重），吸管中残留多 操作时经常远离火焰区 -1 手持试管方式不正确，看不到液面，两支试管口相接触 -1 吸管中吸入样品后在酒精灯火焰上停留（样品中微生物可能灭活） -1 转移样品时，吸管中样液洒出 -1 检测同时未做相应项目的空白实验、环境监测 -1 |
| 1. 样品检测前未混匀 2.往平皿中加样品时远离酒精灯 3.琼脂从55℃培养箱中取出未冷却即浇平板 (无意识) |
| 大肠菌群 | 1.操作时超净台前挡玻璃高，未挡住面部 -1 2.样品容器未进行消毒即放入超净台中 -1 3.样品检测前未混匀 -1 4.吸管接吸头前未过火焰 -1 5.吸管中样液洒出，加入平皿中样品量不准确 -1 6.带菌样液洒到超净台面上未做处理 -1 7.未对培养基、盐水做空白对照 -1 8.大肠菌在伊红美兰平板上的菌落形态不清楚 -1 9.划线方法不正确，未形成单个菌落 -1 10.证实实验回答不正确 -1 |
| 1.操作时无菌间空调处于开启状态 -1 2.超净台无前挡玻璃，操作时未戴口罩 -1 3.同时未对培养基、盐水做空白对照 -1 4.移液管未整体通过火焰 -1 5.接种针灭菌不彻底 -1 | |
| 1、吸样管清洗不干净、管口破损，使样品量吸取不准确 -1 2、接种操作在酒精灯火焰上方，使菌烧死；样品容器打开后口未对着酒精灯火焰区 -1 3、试管塞拔开再盖时有时未过火焰 -1 4、手部消毒后接触超净台外物品，操作前未重新消毒 -1 5、产气的观察方法不全面 -1 6、接种针灭菌后在划线平板上冷却、划线方法不正确 -1 7、伊红美兰平板上的典型菌落判断回答不正确 -1 8、复发酵培养基的成分不清楚 | |
| 1.酒精灯火焰太小 -1 2.需加样品量为0.1ml，样品未经稀释直接加原奶样品0.1ml 于培养基中 |
| 革兰氏染色 | 1.革兰氏染色固定目的不清楚 -2 2.涂片后，放入55℃的培养箱中干燥 -2 3.接种环的使用方法不正确 -1 4.水冲方式不正确 |
| 1.原理、各步骤作用不够清楚 -2 2.未加水,直接将菌落涂在载波片上 -1 3.酒精脱色时间长 -1 4.复染时间不正确 -1 5.涂片太厚,镜检未找到菌 -1 6.显微镜的使用、维护不够正确 | |
| 1.干燥方式不正确，频繁过火焰 -1 2.涂片不均匀 3.染色步骤中媒染的作用不清楚 －1 4.显微镜使用时，选择镜头的转动方式不正确 | |
| 1.载玻片从酒精中取出后处理方法不正确，用蒸馏水冲 2.接种针灭菌方法不正确，灭菌不彻底 -1 3.最后一步染色时间不正确，染10秒 -1 4.水冲后用滤纸覆盖在涂菌上吸水 -1 5.染色结果判断不正确 |
微生物实验操作手法统一
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