主题：求助:孔雀石绿的洗脱

　
7、操作方法

7.1  样品处理

7.1.1  取样

    鱼去鳞、皮，沿背脊取肌肉；虾去头、壳，取可食肌肉部分；蟹、甲鱼等取可食部分。所取样品切为不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小、块后混匀。

7.1.2  称取样品10g～20g(精确到0．001g)，置于匀浆杯中，向杯中依次加3mL盐酸羟胺溶液、5mL对甲苯磺酸溶液和20mL 0.1mol/L的乙酸铵溶液，匀浆2min，转移到250mL三角瓶中，用60mL乙腈洗涤匀浆杯，洗涤液合并到三角瓶中，加入20g碱性氧化铝，用振荡器振荡5min，转移至4支50mL离心管内，30mL乙腈洗涤三角瓶后转移到离心管中，4 000r/min离心15min。

7.2  分离纯化

7.2.1  液一液萃取

7.2.1.1  将离心管上清液移入分液漏斗中，向离心管中加入乙腈，洗涤，离心(4 000r/min，15min)，合并上清液到分液漏斗中，并加入100mL水、50mL二氯甲烷和2mL二甘醇，剧烈振摇分液漏斗，静置1 h。

7.2.1.2  用蒸发瓶收集下层液体后，再往分液漏斗加入50mL二氯甲烷，振摇，静置约10min，待其分层后收集下层液体于同一蒸发瓶。将收集液在35℃下减压旋转蒸发(注意：开始时温度不要直接升到35℃，以免爆沸)至体积约2mL～3mL。

7.2.2  固相柱萃取

7.2.2.1  固相柱制备

    采用中性氧化铝(1g)、PRS填料(0.5g)分别装填两只固相萃取柱，按中性氧化铝柱在前、PRS柱在后的顺序将两柱串联。

7.2.2.2  上样

    使用前用5mL乙腈预洗两柱，然后将7.2.1.2浓缩液体加入5mL乙腈混匀后，缓慢加入中性氧化铝柱内(注意：不要引起柱表面填料浮动。)再用5mL乙腈洗涤蒸发瓶两次，两次洗涤液均加入柱内，最后用5mL乙腈洗涤两柱。

7.2.2.3  洗脱收集

    弃去中性氧化铝柱，用2mL水洗PRS柱，洗脱液弃去；加入0.5mL乙腈：乙酸铵溶液(0.1mol/L，pH4.5)=1∶1，洗脱液弃去；再加人2mL乙腈：乙酸铵溶液(0.1mol/L，pH4.5)＝1∶1，收集该洗脱组分，定容到2mL，经聚四氟乙烯膜(孔径0.45um)过滤，待上机分析。

7.3  样品测定

7.3.1  测定条件

7.3.1.1  色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm；柱后氧化柱:35mm×4.6mm。

7.3.1.2  流动相：乙腈:乙酸铵溶液(0.125mol/L，pH4.5)=80∶20；流速：2mL/min。

7.3.1.3  柱温：35℃。

7.3.1.4  进样量：50µL。

7.3.1.5 检测波长：588nm或618nm。

7.3.2  色谱分析

    分别注入50µL浓度为0.1µg/mL的孔雀石绿溶液、无色孔雀石绿工作溶液及样品提取溶液于液相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱分析，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据标准样品的保留时间定性，外标法定量。标准品色谱图见附录B。

这是分析方法，希望对你有帮助。

现在不是有国标吗．
ＧＢ／Ｔ １９８５７－２００５《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》国家标准