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主题：【已应助】有没有人用液质测多肽的，测量多肽样品稀释度多少，加酸多少？

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piaolingyu
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发表于：2011/08/19 13:10:33 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我是刚开始做液质的
用的仪器是Thermo的液质联用仪
主要用于测定多肽的分子量
问题是现在不知道多肽样品的稀释度多少最合适，
样品中加多少的乙酸使电离度最好
麻烦各位
如果有人刚好做这方面的话
告知一下
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pazuzu
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2011/8/20 15:36:32 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
帮顶一下，我只做过一次，加了大概0.1%的甲酸，建议你自己多试试，再来跟大家分享一下，不用接色谱柱，很快的。
该帖子作者被版主 nankingee加 2积分， 2经验，加分理由：感谢交流
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catty125699
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2011/8/22 12:59:08 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
0.1%甲酸，浓度建议从小试起
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hjb0114
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2011/8/23 16:29:10 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议从0.01%开始，慢慢来。肽类药物在碱性条件下一般信号都不好，酸过多的话也会抑制信号
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piaolingyu
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2011/8/24 9:32:17 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hjb0114(hjb0114) 发表:
建议从0.01%开始，慢慢来。肽类药物在碱性条件下一般信号都不好，酸过多的话也会抑制信号

谢谢了，我加的是0.1%的乙酸。那肽类浓度大概多少合适呢，能否说下。我做的肽类浓度是10-50微克每毫升
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chenrain
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2011/8/24 10:30:57 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我不太明白哦，如果是质谱，lz的这个样品浓度已经完全可以了啊。
lz想问的是做液质的浓度么？
我前几天刚好也是用液质分离了一个多肽样品，浓度大概是0.1mg/ml，上样10ul，在色谱上的响应值不是很高，几十mAU。
联用的流动相一开始用的0.1%TFA，对质谱信号抑制很严重。
后来改用0.025%，信号还行，不过正在考虑是不是换用其它有机酸。
该帖子作者被版主 nankingee加 2积分， 2经验，加分理由：thanks for u share
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piaolingyu
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2011/8/26 11:09:13 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 chenrain(chenrain) 发表:
我不太明白哦，如果是质谱，lz的这个样品浓度已经完全可以了啊。
lz想问的是做液质的浓度么？
我前几天刚好也是用液质分离了一个多肽样品，浓度大概是0.1mg/ml，上样10ul，在色谱上的响应值不是很高，几十mAU。
联用的流动相一开始用的0.1%TFA，对质谱信号抑制很严重。
后来改用0.025%，信号还行，不过正在考虑是不是换用其它有机酸。

是啊，是想问做液质的浓度，
我昨天做了一下，如果只做质谱的，1μ g/ml的样品加0.1%的酸也可以做出来，只是感觉效果不好，可能是我的多肽的纯度不怎么好吧。
做液质联用的，样品浓度0.1mg/ml会不会高了啊
这个我要试试，因为我们的机器还差个色谱柱没有买回来。
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piaolingyu
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2011/8/26 11:13:14 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢了，流动相我也正打算用0.1%的TFA。等我的柱子到了，测出来真如你所说，那估计也行把TFA的浓度降低了
以后这方面的多交流交流啦。。
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steven_sela
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2012/12/3 20:25:28 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 pazuzu(pazuzu) 发表:
帮顶一下，我只做过一次，加了大概0.1%的甲酸，建议你自己多试试，再来跟大家分享一下，不用接色谱柱，很快的。


我今天也做了个多肽的样品，没接色谱柱，流动相加了0.1%甲酸。但+-模式都扫不出我要的分子量。后来直接用100%乙腈情况也差不多。求问是不是甲酸加多了抑制了它的电离？还是我该改些参数？
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2012/12/6 11:29:58 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
0.1%-1%都不会抑制电离。你用针泵进样的，还是自动进样器？浓度是不是太低？
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lics05
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2012/12/14 20:24:53 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
首先多肽样品尽量不含盐，加甲醇至50%，醋酸至1%上样试试
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手机版： 有没有人用液质测多肽的，测量多肽样品稀释度多少，加酸多少？
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