主题：【求助】关于用气相色谱法检测BHA，BHT

食品中叔丁基羟基茴香醚(BHA)与2，6-二叔丁基对甲酚(BHT)的测定方法


　　1　主题内容与适用范围
　　本标准规定了糕点和植物油等食品中BHA、BHT的测定方法。
　　本标准适用于糕点和植物油等食品中BHA与BHT的测定。
　　最低检出浓度：气相色谱法最低检出量为2μg，油脂取样量为0.5g时最低检出浓度为4mg/kg。比色法最低检出量为10μg，油脂取样量为0.25g时最低检出浓度为4mg/kg。
　　2　引用标准
　　GB/T 5009.6食品中脂肪的测定方法
　　第一篇　气相色谱法(第一法)
　　3　原理
　　样品中的叔丁基羟基茴香醚(BHA)和2，6－二叔丁基对甲酚(BHA)用石油醚提取，通过层析柱使BHA与BHT净化，浓缩后，经气相色谱分离后用氢火焰离子化检测器检测，根据样品峰高与标准峰高比较定量。
　　4　试剂
　　4.1　石油醚：沸程30～60℃。
　　4.2　二氯甲烷。
　　4.3　二硫化碳。
　　4.4　无水硫酸钠。
　　4.5　硅胶：60～80目于120℃活化4h放干燥器备用。
　　4.6　弗罗里矽土(Florisil)：60～80目，于120℃活化4h放干燥器中备用。
　　4.7　BHA、BHT混合标准储备液：准确称取BHA、BHT各0.1000g混合后用二硫化碳溶解，定容至100mL，此溶液分别为每毫升含1.0mgBHA、BHT，置冰箱保存。
　　4.8　BHA、BHT混合标准使用液：吸取标准储备液4mL于100mL容量瓶中，用二硫化碳定容至100mL，此溶液分别为每毫升含0.040mgBHA、BHT，置冰箱中保存。
　　5　仪器
　　5.1　气相色谱仪：附FID检测器。
　　5.2　蒸发器：容积200mL。
　　5.3　振荡器。
　　5.4　层析柱：1×30cm玻璃柱，带活塞。
　　5.5　气相色谱柱：长1.5m，内径3mm玻璃柱，于Gas Chrom Q(80～100目)担体上涂10%(m/m)QF－1。
　　6　样品处理
　　6.1　试样的制备
　　采取0.5kg含油脂较多的样品，1kg含油脂少的样品，然后用对角线取2/4或2/6或根据样品情况取有代表性样品，在玻璃乳钵中研碎，混合均匀后放置广口瓶内保存于冰箱中。
　　6.2　脂肪的提取
　　6.2.1　含油脂高的样品(如桃酥等)：称取50.0g，混合均匀，置于250mL具塞锥形瓶中，加50mL石油醚(沸程为30～60℃)，放置过夜，用快速滤纸过滤后，减压回收溶剂，残留脂肪备用。
　　6.2.2　含油脂中等的样品(如蛋糕、江米条等)：称取100g左右，混合均匀，置于500mL具塞锥形瓶中，加100～200mL石油醚(沸程为30～60℃)，放置过夜，用快速滤纸过滤后，减压回收溶剂，残留脂肪备用。
　　6.2.3　含油脂少的样品(如面包、饼干等)：称取250～300g混合均匀后，于500mL具塞锥形瓶中，加入适量石油醚浸泡样品，放置过夜，用快速滤纸过滤后，减压回收溶剂，残留脂肪备用。
　　7　分析步骤
　　7.1　试料的制备
　　7.1.1　层析柱的制备：于层析柱底部加入少量玻璃棉，少量无水硫酸钠，将硅胶－弗罗里矽土(6＋4)共10g，用石油醚湿法混合装柱，柱顶部再加入少量无水硫酸钠。
　　7.1.2　试样制备：称取6.2制备的脂肪0.50～1.00g用25mL石油醚溶解移入7.1.1的层析柱上，再以100mL二氯甲烷分五次淋洗，合并淋洗液，减压浓缩近干时，用二硫化碳定容至2mL，该溶液为待测溶液。
　　7.1.3　植物油试料的制备：称取混合均匀样品2.00g放入50mL烧杯中，加30mL石油醚溶解转移到7.1.1层析柱上，再用10mL石油醚分数次洗涤烧杯并转移到层析柱，用100mL二氯甲烷分五次淋洗，合并淋洗液，减压浓缩近干，用二硫化碳定容至2mL，该溶液为待测溶液。
　　7.2　测定
　　注入气相色谱3μL标准使用液，绘制色谱图，分别量取各组分峰高或面积，进3μL样品待测溶液(应视样品含量而定)，绘制色谱图，分别量取峰高或面积，与标准峰高或面积比较计算含量。
　　7.3　计算
　　
　　式中：m——待测溶液BHA(或BHT)的质量，mg；
　　hi——注入色谱样品中BHA(或BHT)的峰高或面积；
　　hs——标准使用液中BHA(或BHT)的峰高或面积；
　　Vi——注入色谱样品溶液的体积或面积；
　　Vm——待测样品定容的体积，mL；
　　Vs——注入色谱中标准使用液的体积，mL；
　　cs——标准使用液的浓度，mg/mL。
　　
　　式中：X1——食品中以脂肪计BHA(或BHT)的含量，g/kg；
　　m1——待测溶液中BHA(或BHT)的质量，mg；
　　m2——油脂质量(或食品中脂肪的质量)，g。
　　结果的表述：报告平行测定算术平均值的二位小数值。
　　7.4　允许差
　　相对相差(BHA、BHT)≤15%。
　　7.5　其他
　　BHA、BHT气相色谱图：
　　（图略）
　　气相色谱参考条件：
　　色谱柱：长1.5m，内径3mm玻璃柱，10%(m/m)QF－1的GasChromQ(80～100目)。
　　检测器：FID。
　　温度：检测室200℃，进样口200℃，柱温140℃。
　　载气流量：氮气(N2)70mL/min；氢气(H2)50mL/min；空气500mL/min。
　　第二篇　薄层色谱法(第二法)
　　8　原理
　　用甲醇提取油脂或食品中脂肪的抗氧化剂，用薄层色谱定性，根据其在薄层板上显色后的最低检出量，与标准品最低检出量比较而概略定量，对高脂肪食品中的BHT、BHA、没食子酸丙酯(PG)能定性检出。
　　9　试剂
　　以下试剂均为分析纯。
　　9.1　甲醇。
　　9.2　石油醚(30～60℃)。
　　9.3　异辛烷。
　　9.4　丙酮。
　　9.5　冰乙酸。
　　9.6　正己烷。
　　9.7　二氧六环。
　　9.8　硅胶G：薄层用。
　　9.9　聚酰胺粉：200目。
　　9.10　可溶性淀粉。
　　9.11　BHT、BHA、PG混合标准溶液的配制：分别准确称取BHT、BHA、PG各10.0mg，分别用丙酮溶解转入三个10mL容量瓶中，用丙酮稀释至刻度。每毫升含1.0mgBHT、BHA、PG，吸取BHT(1.0mg/mL)1.0mL、BHA(1.0mg/mL)、PG(1.0mg/mL)各0.3mL置同一5mL容量瓶中，用丙酮稀释至刻度。此溶液每毫升含0.20mgBHT、0.060mgBHA、0.060mgPG。
　　9.12　显色剂：2，6－二氯醌－氯亚胺的乙醇溶液(2g/L)。
　　10　仪器
　　10.1　减压蒸馏装置。
　　10.2　浓缩瓶具刻度的尾管。
　　10.3　层析槽
　　a.24cm×6cm×4cm；
　　b.20cm×13cm×8cm。
　　10.4　玻璃板：5cm×20cm、10cm×20cm。
　　10.5　微量注射器：10μL。
　　11　分析步骤
　　11.1　提取
　　11.1.1　植物油(花生油、豆油、菜籽油、芝麻油)：称取5.00g油置10mL具塞离心管中，加入5mL甲醇，密塞振摇5min，放置2min，离心(3000～3500r/min)5min，吸取上层清液置25mL容量瓶中，如此重复提取共五次，合并每次甲醇提取液，用甲醇稀释至刻度。吸取5mL甲醇提取液置一浓缩瓶中，于40℃水浴上减压浓缩至0.5mL，留作薄层色谱用。
　　11.1.2　猪油：称取5.00g猪油置50mL具磨口的锥形瓶中，加入25mL甲醇，装上冷凝管于75℃水浴上放置5min，待猪油完全溶化后将锥形瓶连同冷凝管一起自水浴中取出，振摇30s，再放入水浴30s；如此振摇三次后放入75℃水浴，使甲醇层与油层分清后，将锥形瓶连同冷凝管一起置冰水浴中冷却，猪油凝固，甲醇提取液通过滤纸滤入50mL容量瓶中，再自冷凝管顶端加入25mL甲醇，重复振摇提取一次，合并二次甲醇提取液，将该容量瓶置暗处放置，待升至室温后，用甲醇稀释至刻度。吸取10mL甲醇提取液置一浓缩瓶中，于40℃水浴上减压浓缩至0.5mL，留作薄层色谱用。
　　11.1.3　食品(油炸花生米、酥糖、巧克力、饼干)：按6.2测定脂肪的含量，并称取约2.00g的脂肪，视提取出的油脂是植物油还是动物性脂肪而决定提取方法。可按11.1.1或11.1.2操作。
　　11.2　测定
　　11.2.1　薄层板的制备
　　11.2.1.1　硅胶G薄层板：称取4g硅胶G置玻璃乳钵中，加10mL水。研磨至粘稠状，铺成5cm×20cm的薄层板三块，置空气中干燥后于80℃烘1h，存放于干燥器中。
　　11.2.1.2　聚酰胺板：称取2.4g聚酰胺粉，0.6g可溶性淀粉置于玻璃乳钵中，加约15mL水，研磨至浆状铺成10cm×20cm的薄层板三块，置空气中干燥后于80℃烘1h，置干燥器中保存。
　　11.2.2　点样
　　11.2.2.1　用10μL微量注射器在5cm×20cm的硅胶G薄层板上距下端2.5cm处点三点：标准溶液5μL、样品提取液6～30μL、标准溶液5μL。
　　11.2.2.2　另取一块硅胶G薄层板点三点：标准溶液5μL、样品提取液1.5～3.6μL、加标准溶液5μL。
　　11.2.2.3　用10μL微量注射器在10cm×20cm的聚酰胺薄层板上距下端2.5cm处点：标准溶液5μL，样品提取液10μL，加标准溶液5μL，边点样边用吹风机吹干，点上一滴吹干后再继续滴加。
　　11.2.3　展开
　　11.2.3.1　溶剂系统
　　硅胶G薄层板：正己烷－二氧六环－乙酸(42＋6＋3)，异辛烷－丙酮－乙酸(70＋5＋12)。
　　聚酰胺板：
　　a.甲醇－丙酮－水(30＋10＋10)；
　　b.甲醇－丙酮－水(30＋10＋12.5)；
　　c.甲醇－丙酮－水(30＋10＋15)。
　　对甲醇－丙酮－水系统，芝麻油只能用a、菜籽油用b，食品用c。展开系统中水的比例对花生油、豆油、猪油中PG的分离无影响。
　　将点好样的薄层板置预先经溶剂饱和的展开槽内展开16cm。
　　11.2.3.2　展开
　　11.2.3.2.1　硅胶G板自层析槽中取出，薄层板置通风橱中挥干至PG标准点显示灰黑色斑点。

标准我都有，

太复杂了吧？

国标有些都不太适用~~
做为资料了解还可以！

层析拄填料装紧一点,可能会好一点,滤纸过滤可吸附油,

该方法不实用，有不有更好的方法 啊？请大虾赐教。