主题：【分享】几种不太常用又很实用的紫外分析方法

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发表于：2011/09/05 13:37:04 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

几种不太常用又很实用的紫外分析方法

作者：lwinna 来源：丁香园药物分析版

大多数具有共轭结构的化合物在200～400nm范围内有紫外吸收（一些不具有共轭结构也有紫外吸收，例如含有Br I等基团的化合物），另外还有一些有色物质，均可以利用紫外-可见分光光度法进行快速的分析，既可作定性分析又可作含量测定等优点。
基本的原理与操作各种书籍均有讲解。实际上由于紫外的一些局限性，在很多时候不能使用这个简便快速的方法，给我们的工作造成了时间上的巨大浪费。常见的溶出度与释放度的方法摸索，在辅料干扰或者吸光度低下的时候，迫于无奈而使用HPLC，由于取样点多且需要测定6片，造成了巨大的时间浪费，如果没有自动进样装置，那可真是痛苦啊。
难道没有办法解决么，懒人自然能找到懒办法，但是再懒方法也得可行才能使用，下面介绍几种简单好用的方法，由于HPLC的迅速发展，UV法正在逐渐退出定量测定的舞台，但是其方便易用，我们实际工作中经常用于中间体的控制与含量的粗测。下面几种方法强烈不建议订入质量标准中，可仅作为一种方法使用，如果在其他方法佐证下没有明显差别的时候可以使用或者试验条件不能满足其他测定的时候。

1、辅料等干扰
1.1等吸收双波长消去法
主要应用在混合物中不经分离而直接测定某一个成分的含量方法。
a与b两种物质的吸收光谱完全重叠，欲消除b组分的干扰直接测定a组分。
首先要选择采用两个测定波长λ1和λ2 ，测出在两波长处的吸光度，依据吸光度的加和性列式，然后计算混合物在两个波长λ1和λ2处的总吸光度的差值△A来求算出待测组分a的含量。
选择两个测定波长的原则
1）使干扰组分（待消除组分）在这两个波长具有相同的吸光度A1b A2b
2）使待测组分a这两个波长ΔAa足够大
优点：故该方法测混合物时，可不经分离直接测定待测组分。

1.2解方程法
两种物质共存，其吸收光谱完全重叠的时候，我们利用吸光度的加和性，即混合物的总吸光度等混合物中各组分的吸光度之和，所以也可通过解方程计算：

1.3一（多）阶导数分光光度法

可以不经过复杂的分离程序，就能直接去除干扰成分的影响，直接扫描一（多）阶导数光谱，如无该项功能，亦可自己计算后绘制，其他计算与注意事项同紫外-可见分光光度法。
05版药典中硫酸庆大霉素缓释片、盐酸左旋咪唑片采用该法。
需要注意的是二阶导数。。。。。。N阶导数，只有当摩尔吸收系数ε对波长λ的变化率dε/dλ为零时，其导数值才与溶液浓度成线性，因此多阶导数不是随便应用的。但是高阶导数的灵敏度是倍增的，会出现极高的重现性。
2.吸光度值不合适-示差分光光度法
示差分光光度法分为最精确测定法、高浓度测定法和低浓度测定法，有时称放大标尺法。最精确法实际是后两种法的综合。示差分光光度法适用于低浓度样品分析，尤其适用于高浓度样品的分析。
用示差分光光度法进行定量分析时，其准确度高于普通分光光度法，仅对分光光度计的灵敏度和稳定性要求较高，在很久以前需要特殊装置的分光光度计，但是目前的紫外-可见分光光度计的稳定性、灵敏度均较高，在很大程度上可以满足差示分光光度法的要求，具体可以验证后使用。
由于实际上我们常碰到的是样品浓度过低，因此仅说一下我们会用到的低浓度测量法，高浓度的我们可以稀释后测定，中等浓度的不必使用该法。
低浓度测量法—低吸收法
首先用纯溶剂调节Ts1=100%，然后用一个比样品溶液浓度稍大的标准溶液作调节Ts2=0%，测量样品溶液的吸光度值。
1＝Ts1＞T样＞Ts2＞0
适用于吸光度小于0.1的低浓度样品的测量，注意ΔA与浓度呈非线性关系。
计算：
(1) 标准曲线法配制一系列标准溶液
用示差法在一定波长下测定表观吸光度ΔA，ΔA为纵坐标，ΔC为横坐标绘制标准曲线。然后用同样方法测定样品溶液的ΔA，用标准曲线计算ΔA。最后由ΔC＝Cx-Cs(Cs作为参比的标准溶液浓度)求得样品溶液浓度。
(2)加入法分别取同一种样品溶液5ml(a)、10ml（b）和10m1(c)，在第三份(c)中加入1ml标准溶液(例如浓度为1mg／ml)，均稀释至100ml。
以(a)为参比，在一定波长下测得(b)、 (c)吸光度分别为Ab和Ac，则Cx*Ax/ΔA*ΔC
Cx样品溶液浓度（mg/100ml）
Ax样品溶液吸光度 Ax=Ab
ΔA=Ac-Ab
ΔC=Cc-Cb
注意事项：
(1)示差分光光度法中重要的是选择适当浓度参比溶液，参比溶液浓度越接近样品溶液，则测定结果越准确。
(2)示差分光光度法解决了普通分光光度法中不适用的痕量物质的分析。
(3)示差分光光度法要求分光光度计稳定性好、灵敏度较高。
原理图：