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主题：【第六届原创】新手大肠杆菌阳性实验自白

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发表于：2011/09/08 09:02:14 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
维权声明：本文为zxm-1980原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

新手大肠杆菌阳性实验自白



在食品加工过程中“微污染源”很多，如何防止食品被污染乃是一重要课题。大肠杆菌作为为微污染源中的一种，我们怎样认识它。他究竟有什么样的形态特征，这些东西靠书本上的理论图解和其他人的实验分析是不够的，只有自己通过整个实验，见证整个过程，这样才能这种微生物实验的要领。

1.实验准备：

  1.1 购买的整个过程就不要说了，先展示以下菌种，




第一个图有点看不清，只显示大肠杆菌保质期到2012年3月，第二个图是它里面的东西（不知道怎么称呼）。

1.2准备营养琼脂平板2个，

2.菌种活化

2.1仔细阅读说明书，体会每一步操作，因为一不留神你就会犯错误。先将菌种上的标签撕下贴在琼脂平板上。为了防备以外我接了两个板。

2.2活菌种的结构下端是干燥的菌种，上端是无菌生理盐水，接种时要将上端生理盐水捏破，让水流入下端的干燥菌种上，然后使其混匀。



2.3挤压下端活菌种，让棉式子沾满带有活菌种的菌液，将其在营养琼脂平板上均匀的画一个圆圈直径1.5-2cm。


2.4用接种环在营养琼脂平板上均匀划线。将上面的菌种划开。



2.5将上述接种好的营养琼脂平板放入培养箱，37℃培养24h。观察长势。
附件：
微生物大肠杆菌阳性实验.doc
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dahua1981
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2011/9/8 9:17:33 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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2011/9/8 9:24:43 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
3接种

3.1将培养好的大肠杆菌平板接种划线到伊红美蓝琼脂平板（EMB），培养24h。



3.2检查平板上有无黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落，菌量太多分不清典型菌落了，成了一条黑线。



3.3将伊红美蓝平板再接种划线到试管营养琼脂斜面，培养24h。



4生化实验及革兰氏染色

4.1革兰氏染色

4.1.1染色液准备，从右到左分别是：结晶紫染色液 革兰氏碘液 95﹪乙醇 沙黄复染液。



4.1.2染色过程：

1.取一滴无菌食盐水于载玻片上，用接种环转移菌种于食盐水中并均匀涂布于载玻片上，使其有一定形状，如圆形或方形。自然晾干，或烤干，温度不宜过高，不烫手为宜，最后将涂片在火焰上固定。

2.滴加结晶紫染色液，染色1min，用柔水冲洗。

3.滴加革兰氏碘液，染色1min，用柔水冲洗。

4.滴加95﹪乙醇脱色，脱色要适中，以脱掉颜色即可，过轻假阳性，过重假阴性。

5.滴加复染液，复染1min。水洗晾干，镜检。





4.1.3显微镜检验

先用低倍镜观察，看到的很清晰但成片，再用高倍镜观察，看到的是每个菌株，但不典型，再用油镜观察，菌种形状很典型。红色杆状的菌株。显微镜不能拍片，很遗憾。



4.2生化实验

4.2.1药品准备及接种

从右到左分别是，色氨酸肉汤 MR-VP 西蒙氏枸橼酸盐。分别用接种环接种到以上药品中，培养箱培养24h。



4.2.2结果观察

培养24h后生化实验



色氨酸肉汤滴加2滴靛基质试剂出现红色环显阳性。



VP：按6：2的比例依次滴加VP甲液乙液30min后，颜色没变化，仍显黄色呈阴性。

MR：48h后滴加甲基红，颜色显红色，呈阳性


西蒙氏枸橼酸盐培养96h颜色仍未变色显深绿色，呈阴性。



4.3结果

从微生物显微镜检测以及生化鉴定，都充分证实是典型的大肠杆菌。每一步骤的变化，都具有大肠杆菌的典型特征，由此可见，检验过程的操作还是比较成功的。

5.结论

大肠杆菌阳性实验，虽然不是什么有难度的实验，但对于新人来说是很有必要的，对于从来没有做到（真）菌的试验者也是很有必要的，此次实验虽然没有什么新的创意和变化，但详细展现了实验的整个操作过程，给没有做过阳性对照实验的操作者一个借鉴。
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乐果
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2011/9/8 9:30:33 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
新手操作有不规范或错误的地方，请各位专家及时批评指正，拜谢。
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薄荷草
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2011/9/8 9:40:45 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
嗯。图文并茂的好原创！原创其实很简单吗，楼主继续～哈哈
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titi
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2011/9/8 10:21:51 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
划线菌落分的不是很开啊~~~
嘿嘿，染色我一般就直接用烤了，木有尝试过晾干，楼主两种都尝试过吗？观察效果有影响吗？
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菲菲问问
lijing2010
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2011/9/8 10:23:55 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
支持楼主，原创不在技术有都么高，重在用心与实际操作。
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菲菲问问
lijing2010
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2011/9/8 10:29:39 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
新手能做到这样，就很好了，能够做阳性试验就很幸福。
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【四季风】
gpwrx
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2011/9/8 10:46:13 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
接种菌时带乳胶手套，到涂片染色时为什么就不带乳胶手套了呢？要养成良好的工作习惯，特别是分离阳性菌时更加需要注意。
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2011/9/8 10:49:34 Last edit by gpwrx
乐果
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2011/9/8 10:48:58 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
薄荷草说的轻松，今年原创我自身感觉不如去年，不知道什么原因。
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乐果
zxm-1980
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2011/9/8 10:53:02 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
TT说的没错，本来还有一个对照板，没传上来，可能是菌株多加手法生疏，造成这个结果。菌株全都长成一条线了。
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