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液相色谱（LC）
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主题：【求助】液相色谱没有重复性

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fengchengyade
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发表于：2011/10/27 10:44:32 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
大家好，我现在在做色谱，但是几个月了重复性都没有，一直找不到原因，请大家帮忙分析下
    柱子：BDS-Hypersil C8  column  (150 mm×4.6 mm,  5 μm)，
    仪器：岛津2010
    最开始是用10mmol∕L醋酸钠与乙腈（95﹕5），pH4.5.天间有重复性，天内也有重复性，晚上用小流速流动相冲了，第二天也有 重 复性（同一个标准品），
    然后我要多测一个物质犬尿喹啉酸，这个物质在体内含量和低，必须荧光衍生，国内外基本上都用醋酸锌，
  色谱条件变为：10mmol∕L醋酸钠和5mmol∕L醋酸锌，pH3.8,做了几天，每天的保留时间都不同（一次性配1000ml流动相用三天），时间变化的方向也不同。查文献要300ml超纯水冲洗才能把锌离子冲干净，但是我冲了很长时间，我连续进了5针，一个小时都做完了，这5针有重复性，但是6个小时后我又进样，这是保留时间很乱了，变了2分钟。
  我怕是柱子坏了，就用超纯水冲两天柱子后，只用95%水和5%甲醇，温度30度，流速0.6ml∕min,早上到晚上都冲着，一直进样，有重复性，但是晚上小流速后第二天保留时间又不同了。做醋酸锌时上午保留时间重复，到下午了就变了2min，且一直在变，方向有时是一个方向，有时不是一个方向。我真的是不知道怎么办了，希望大家帮我想个办法，怎么一个个排除问题。非常感谢！！
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xyhdcm2002
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2011/10/27 10:45:23 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用盐对柱子伤害很大。。。。
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xydell
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2011/10/27 14:05:28 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
含盐的流动相要当天配当天用的，不能连续用3天。
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fengchengyade
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2011/10/27 15:31:15 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xydell(xydell) 发表:
含盐的流动相要当天配当天用的，不能连续用3天。


我之前那个也是用了三天，呵呵，
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zhaohua8011
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2011/10/28 12:51:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可能是色谱柱的问题，要用完及时冲柱，在则系统没平衡好！
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peterhello
peterhello
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2011/10/28 14:53:16 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
金属离子会对保留产生比较大的影响，所以现在的硅胶基质都是超纯的，金属离子含量很低。荧光衍生，个人理解可以柱后在线用一个三通添加醋酸锌，不必加在流动相里
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yukepotato
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2011/10/28 15:16:53 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 peterhello(peterhello) 发表:
金属离子会对保留产生比较大的影响，所以现在的硅胶基质都是超纯的，金属离子含量很低。荧光衍生，个人理解可以柱后在线用一个三
通添加醋酸锌，不必加在流动相里

你好，能解释下柱后添加怎么操作啊，需要什么东西？
谢谢
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taoruo
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2011/11/2 15:33:43 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相梯度设置是否跟泵的停止时间一致，比如梯度还没走完，就进了下一针，保留时间会偏移很大
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xiaowang268
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2011/11/3 11:12:13 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
多平衡一下，看看
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tangtang
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2011/11/12 21:01:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
试试用一个保护柱。
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cai100
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2011/11/13 19:20:24 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有没有恒定柱温阿？你可以参考下下面这个文献
http://www.docin.com/p-184254955.html
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