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主题：【分享】正确使用DEPC

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发表于：2011/12/01 15:32:12 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
DEPC有致癌性，不能处理Tris溶液等这些事项大家都知道，所以不谈。谈一些实验室中的操作误区。

误区一：重复使用含DEPC的水处理枪头、离心管等。由于DEPC较贵，而且书上说DEPC要用高压灭菌处理去除，于是有些人就萌发了重复使用DEPC的想法，即对含有DEPC的水不进行高压灭菌，从而重复使用含DEPC的水处理枪头、离心管等。节约本是好事，但这样的节约是无效的。为什么不能重复使用含DEPC的水，因为DEPC在水溶液中不稳定，极易分解，DEPC在pH6.0和pH7.0的PBS缓冲液中的半衰期分别约为20min和10min，DEPC在水中的半衰期约为30min。因此，重复使用含DEPC的水就不能保证枪头和离心管的RNase-free。

误区二：必需长时间高压灭菌来彻底去除DEPC。用DEPC处理过的溶液，在15－20min的高压灭菌后还可以闻到一股特殊的香味，因此有人认为高压灭菌去除DEPC不彻底，所以要延长高压灭菌的时间以完全去除DEPC。但是延长高压灭菌的时间并不需要，因为闻到的特殊香味不是DEPC的，而是DEPC分解产物之一的乙醇同溶液中残留的微量的羧酸（如甲酸和乙酸等）反应产生的挥发性脂类。这种特殊的水果香味不代表有痕量的DEPC残留。

误区三：溶液中DEPC含量约高，灭活RNase的效果越好。这个误区错了一半，的确，1% DEPC能灭活高达1000 ng/ml的RNase A，而0.1% DEPC只能灭活少于500 ng/ml的RNase A。但是溶液中残留的DEPC副产物会抑制一些酶反应，例如DEPC副产物会抑制体外转录反应，因此DEPC含量越高，高压灭菌后的DEPC副产物就越多，抑制越明显。
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2011/12/1 15:42:10 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
那实验的时候加多少合适呢？实验确定没呢
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2012/2/16 15:51:44 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ain1223(ain1223) 发表:
那实验的时候加多少合适呢？实验确定没呢


分子克隆上说提RNA的话，一般用0.1%的DEPC水灭菌后用就成了。
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