主题：【第六届原创】三年工作小结

浏览0 回复14 电梯直达

xiaowang268

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2011/12/21 09:22:43 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

维权声明：本文为xiaowang268原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

回想起三年来的日日夜夜，付出了很多，收获了很多，与大家共同分享。

对自己三年来的工作做个小结，主要分为三个阶段

1. 一年时间的细胞培养及其特定蛋白的分离纯化

2. 一年时间的药物合成

3. 一年时间的色谱分析

首先是高表达特定蛋白细胞的培养。

经过细胞复苏、换液、传代、培养、收集、液氮中冷冻等一系列过程，最终得到一批高表达特定蛋白的细胞。在一定的裂解液、增溶剂、透析液作用下，破碎细胞，再经离心等前处理，得到含有所需蛋白的粗混合液。利用亲和层析法对特定蛋白进行分离、纯化，经检测器检测，收集所需馏分。将所得到的溶液经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，以确定最终得到的所需蛋白及其纯度。最后，通过冷冻干燥，将提取液浓缩至一定体积，并于-70℃冷藏备用。

键合蛋白色谱柱的制备。

经化学反应，将所提纯的蛋白键合在大孔硅胶表面，得到色谱固定相，以缓冲盐溶液为匀浆液和顶替剂，采用湿法装柱，在400 bar的压力下，经依利特装主机裝填，得到键合有特定蛋白的色谱柱，在缓冲盐溶液体系下，将所得到的色谱柱以低流速冲洗过夜。从而得到键合有特定蛋白的色谱柱。

色谱柱上所键合的特定蛋白对治疗某疾病的药物具有结合作用，从而可以对某化合物活性进行初步的验证。

化学合成一系列的化合物，并经IR、MS、NMR对其结构进行确定。利用缓冲盐溶液将其溶解，不易溶解的可以加入少量的DMSO溶解，过膜后，在适当的检测波长、流速及缓冲盐浓度下，以合成得到的色谱柱对其进行分析研究，与色谱柱上的蛋白具有特殊结合作用的化合物可在柱子上得以保留，从而对所合成化合物进行初步活性验证与筛选。

所合成色谱柱对中药中的活性成分也具有筛选作用。将中药提取液过膜后，在适当色谱条件下进样进行分析，提取液中与蛋白有结合作用的活性成分得以保留，并与其他成分分离。对保留成分进行收集，经MS、NMR等手段对其进行检测，可得到其具体信息。使复杂样品的分离和筛选在同一色谱过程中完成。

由于蛋白的保存条件苛刻，所以以上色谱分析过程均在4℃条件下进行。

色谱技术以其高的分离能力，在新药开发和研究方面得到了广泛的应用。创新药物的研究和开发是一项复杂的系统工程，具有风险高、投资大和周期长等缺点。其中，候选药物的发现和筛选是缩短研发周期，降低研发成本最为关键的环节之一。

药物活性物质的筛选是制约整个新药研发工作的瓶颈。本研究技术是将蛋白对药物识别的高特异性和色谱的高分离能力结合起来的分析技术，也就是基于蛋白等药靶的药物高通量筛技术。对于创新药物的发现具有重要意义。

回想起三年来的日日夜夜，付出了很多，收获了很多，与大家共同分享。

下面是实验过程中所用到过的部分仪器：