主题:大豆分离蛋白水解

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hxm081
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请教各位大侠,用HPLC做氨基酸分析,样品前处理,怎么进行水解成为游离氨基酸
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honest
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我知道用全自动氨基酸分析仪测氨基酸的方法,是柱后衍生,先发你一个酸处理的方法吧,处理出来的氨基酸不包括met,cys和trp
1、酸水解前处理1.1仪器设备分析天平0.0001g;样品粉碎磨;移液枪:200mL、1000mL;离心机:16000r/min;干净的酸水解培养管;移液管:10mL;;进样小瓶;安培管:1.5mL;定量滤纸:f9cm。1.2试剂与溶液配制6 mol•L-1的盐酸溶液:37%盐酸:水=1:1(V:V)4 mol•L-1 氢氧化钠溶液:160g氢氧化钠容于水中,并定容至1000mL,冷却,用0.45mm滤膜过滤。稀释用缓冲溶液(Buffer):pH2.2, c(Na+)=0.2 mol•L-1 称取柠檬酸三钠19.60g,用水溶解,加入优级纯盐酸16.5mL,硫二甘醇5mL和苯酚1g,用水定容至1000mL,并用0.45mm滤膜过滤,贮于冰箱中,用前取出放置室温。1.3试样准备    选取有代表性的试样,粉碎过60目分析筛。1.4分析步骤称量试样(不超过100mg:粪样约90mg、配合料约60~70mg、豆粕约50~60mg)于培养管底部(尽量不要将样品沾在瓶壁上),试样粉碎需通过0.25mm分析筛(60目)。加10mL 6mol•L-1的盐酸溶液(先加2mL振荡,充分浸湿,后用其余8mL沿壁冲下)充氮气0.3 m3/h-1,约15s,封盖(紧!),记号笔划水平刻度线。前处理室烘箱110℃ 水解22-24 h,并在烘箱门上用纸条做好标识(用途、时间、实验者和日期)。到时取出冷却,摇匀,用定量滤纸过滤到安培管,约30滴,避免样品间污染。离心(前处理室小离心机),15min,16000r•min-1。校准移液枪,750μL在天平上称量应为750mg(调刻度)中和,取已过滤的4mol•L-1氢氧化钠溶液150μL和750μL上机用缓冲液(冰箱),加入上机样品瓶中,再加入100μL样品液,振荡,加盖,上机。
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