主题：【第六届原创】HPLC四元低压系统双泵混合（等度）样品保留时间漂移问题的解决

色谱条件：waters Alliance2695 系统，2489检测器。
                    waters symmetry C18 150*2.1mm，3.5um。
                    柱温30℃，样品温度15℃，进样量10ul，运行时间40min。
                    流动相：乙腈-水39:61      流速0.4ml/min
当流动相预先混合好后用单泵运行时，样品保留时间很稳定
但当A泵走乙腈，B泵走水以相同比例混合运行时，保留时间却一直在漂移这图太难看就不上了。
步骤一，工程师
开始查找原因，首相想到的是是不是双泵走的比例不稳定，如果是这样的话仪器就是有问题的。
找工程师测试，色谱条件甲醇：水（40:60）双泵运行，柱温32度，样品时温度15，流速1ml/min，色谱柱symmetryC18，4.6*75mm，3.5um。结果三个峰保留时间都很稳定，仪器没问题，保留时间数据如下表。
步骤二，旧柱预测试
只能开始用我们自己的方法查找原因，新柱子舍不得用，用旧的。
运行到第10针以后保留时间才开始稳定。
思考中：是不是因为该色谱柱长时间未使用而需要比较长的时间平衡？如果是这样，那我将该色谱柱保存在流动相中，第二天继续该实验的话，他的保留时间应该会很快稳定吧，就这么做了。

步骤三，旧柱保存与流动相后实验
第二天的数据如下，运行200多分钟以后保留时间开始稳定。
思考中：看来是有平衡的原因，但为什么还需要200多分钟才稳定呢，不正常。
步骤四，保留时间稳定的系统不停换新色谱柱
既然现在保留时间已经稳定，我是不是可以换一个色谱柱（系统不停）看看呢？就这么做，换新柱（相对旧柱来说），平衡30分钟，进样，保留时间很稳定，如下表。
思考中：现在开始怀疑两点。1.是不是旧柱已经不行了？2.是不是走双泵的时候仪器需要预热？
为了确定以上两点，下面开始两个实验（步骤五，步骤六）。
步骤五，新柱保存于流动相后第二天开机运行
将新柱保存流动相中，第二天重新开机运行（与上面旧柱的那个步骤作比较）。
先平衡100分钟，然后进样。数据如下。
前几针保留时间不稳，加上之前平衡的时间，差不多也是运行了200分钟之后保留时间才开始稳定，和旧柱差不多。现在基本上可以肯定我的第二个猜想了。
步骤六：证明双泵运行需预热
将仪器开启，双泵运行，但是不接色谱柱，将流速开到1.5ml/min，运行40分钟，0.4的流速平衡色谱柱，进样，数据如下。
除第一针外，保留时间相当稳定。
原因分析，待续。