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主题：【求助】HPLC 测苯甲酸不出峰是怎么回事？

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bzj
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发表于：2010/05/24 14:16:20 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用液相（二极管阵列检测器，waters C18柱，250mm*4.6mm,）测苯甲酸(0.5mg/mL，甲醇配制)，流动相5:95的甲醇和水，30min样品不出峰。 流动相的比例换成梯度，样品在十几分钟（甲醇/水为70:30）出一个很宽的大包（约宽3-4min）。 我们用的色谱柱是新的，是不是柱子的极性太强，还是需要在流动相中添加离子缓冲剂，例如醋酸铵？
各位有没有这方面的经验，望多多指教。谢谢！
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跳来跳去的毛毛
maomao3323
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2010/5/24 14:40:16 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
增大甲醇的比例，增大到35%再试试，可以用缓冲液代替水，比如磷酸二氢钾。
甲醇效果不好用乙腈。
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wanxiaolongsioc
wanxiaolongsioc
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2010/5/24 16:27:21 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相中加点酸试试。
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柏坡
hgycook
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2010/5/24 17:07:05 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
WATERS哪款柱子？缓冲盐 酸性条件试试。
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johne0212
JOHNE0212
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2010/5/24 17:41:44 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
Mobile phase for HPLC: ammonium acetate 5 mmol/L – acetonitrile (7+3)
Into a HPLC container, mix 700 mL ammonium acetate buffer solution  and 300 mL acetonitrile.

Prepare this solution fresh daily


给你流动相的配比,另外,色谱柱C18 250*4.6mm
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weiyh_001
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2010/5/24 17:47:22 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
应该使用甲醇-1%醋酸溶液（40:60）就可以了。
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老多_小多
emoc98311
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2010/5/24 17:54:48 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很宽的大包也许就是
都是不会要这么大的甲醇比例啊？你的标准液也有问题，浓度太高，为什么不按标准做？
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bzj
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2010/5/25 15:26:39 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
很宽的大包也许就是
都是不会要这么大的甲醇比例啊？你的标准液也有问题，浓度太高，为什么不按标准做？


那个很大的包，通过光谱扫描，应该是苯甲酸的峰。流动相的比例用那么大，是因为甲醇含量低了，样品不出峰（大包也不出）。
国标GB/T 5009.29-2003标准储备液的浓度是1mg/mL, 标准混合液的浓度是0.1mg/mL. 我配的0.5mg/mL也不是很大，因为出的那个包的峰面积并不是很大，况且我是想看看苯甲酸中有什么杂质。
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bzj
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2010/5/25 15:27:51 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 跳来跳去的毛毛(maomao3323) 发表:
增大甲醇的比例，增大到35%再试试，可以用缓冲液代替水，比如磷酸二氢钾。
甲醇效果不好用乙腈。


多谢，我试试。乙腈太贵了，最好还是甲醇能行。
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bzj
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2010/5/25 15:29:28 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 柏坡(hgycook) 发表:
WATERS哪款柱子？缓冲盐 酸性条件试试。


waters SunFire C18 5微米
4.6*250 mm色谱柱
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mxqiong
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2010/5/25 16:22:06 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用甲醇和醋酸铵做流动相就可以，甲醇的比例5-10之间就可以。另外，这个好像用150的柱子就够了。
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