主题：【转帖】可见——紫外分光光度法（UV）

浏览0 回复3 电梯直达

省部重点实验室

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2012/02/22 11:17:17 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

可见——紫外分光光度法（UV）

200～800nm内有选择性吸收
一、方法特点：
⑴选择性较好：①物质本身光谱不同，具选择性吸收；②化学反应使吸收改变。
⑵灵敏度：可测10-4～10-7g/ml。
⑶精密度：相对误差0.2～5%（直接uv0.2～1%；比色法2～5%）。
⑷仪器简单,操作简便。
⑸结合化学计量学方法测复杂样品（多组分）。
⑹测一些化学常数。
二、光谱表示方法和谱带的强弱分类
表示方法：
①吸收曲线表示：A-λ图谱、T-λ图谱、E% 1cm-λ图谱、ε-λ图谱、lgE% 1cm -λ图谱、lgε-λ；
②光谱数据法：λmax与溶剂有关，故常以溶剂的λmax表示，E% 1cm·λmax、λmin。
⑵谱带的分类：
ε：～10～100～1000～104～105-7～
弱很弱中强强很强
中强吸收以上——可定量分析
中强吸收一下——只可做定性分析
⑶分子的结构，电子跃迁类型和吸收带；
结构：①饱和烃类：σ～σ*→λmax＜＜200nm
②含饱和杂原子的饱和烃：n～σ*跃迁→200nm附近
-X、-OH、-SH、单个cl取代：λmax＜200nm（末端吸收）
-cl3、-Br、-I、-NH2：λmax＞200nm（原子数目越多，吸收波长越长）
③含孤立双键的分子：烃类λmax＜200nm；
含不饱和杂原子=O，λmax＞200nm，ε＜100，R带，弱吸收：与烃类相连280～300nm；与-X相连200～240nm。
④共轭的π～π体系：λmax＞215nm, ε≥104强吸收，K带
每增加一个共轭单位，λmax增加30nm左右，5个共轭单位，λmax＞350nm
σ～π、p～π和π～π都可使λmax增大，而且与取代基的性质和位置有关。
苯取代：振动精细结构：溶剂极性增加，精细结构下降；
取代基性质：极性基团取代，精细结构减弱或消失；
取代基数目：数目增加，精细结构较弱或消失；
不饱和基团取代：E1、E2、B、K带λmax增大；
饱和基团取代：E1、E2、B带λmax增大；
⑤立体异构，互变异构
⑥PH效应：酸碱基团的离解
⑦电荷转移跃迁：配合物显色（内氧化还原过程）。
三、紫外光谱的溶剂
主要考虑：⑴对溶质有适当的溶解度（结构、极性相似：相似相溶）
⑵溶剂吸收波长的极限（截止波长A=1）、纯度
⑶溶剂的极性和氢键效应：极性增大，K带长移
⑷溶剂的挥发性、可燃性、毒性、化学惰性
⑸对光的敏感性、放射性、稳定性。
四、影响吸收曲线的因素：
溶剂、酸碱性、波长、温度、溶解的热效应、干扰离子、离子强度、光照、氧化还原电位、助溶剂、水解、荧光效应、浑浊度、沉淀等。
五、常用空白溶液（参比溶液）的选择
样品溶液的组成：被测组分：A=KC；
样品的共存物（基体）
溶剂：纯溶剂本身吸收；杂质吸收
试剂：显色剂、缓冲剂等
溶解性杂质：容器中吸收的杂质；空气中吸收的杂质
①溶剂空白；②试样空白（差示分光光度法——△A法）；③试剂空白（测定波长处A<1）；④平行操作空白；⑤空气空白。
六、物质的鉴别
核对光谱曲线；一个或几个λmax ±1～5nm；
一个或几个λmax、λmin;
核对光谱数据： λmax、E% 1cm；
Amax1/ Amax2、Amax/Amin；
一定浓度下，Aλmax。

0
赞贴
3
回帖
0
收藏
0
拍砖
版主
招募

为您推荐

近期热榜

热门活动

您可能想找: 紫外、紫外分光光度计、紫外可见分光光度计、UV 询底价

选参数看心得找厂商查方案

专属顾问快速对接

立即提交

相关阅读

省部重点实验室

禁止发帖修改昵称

ID：gl19860312

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2012/2/22 11:17:41 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

七、UV法的误差
来源：化学因素；光学因素；仪器测量误差；操作误差等。
（一）化学因素
化学条件的选择，通过作A与化学条件的图谱（A-PH、Cn、t、T、……），选择曲线平坦且宽敞处对应的条件。
（二）光学因素：单色光纯度；杂散光；偏光
1.单色光纯度不好导致吸收曲线变形，使A-C曲线弯曲；
单色光的谱带宽度（狭缝宽度，nm）、S或△λ；
△λ大，光越不纯，当△λ合适时，所测A是最大的；
影响△λ的因素：光的强度，光越强，其值越大；空白的吸收越强，△A越大。
2.杂散光：单色器通道以外还存在的光占总光的比例
一般杂散光T%≤1%,《中国药典》用1%的NaI测220nm的T%，要求≤0.8%；用1%的NaNO2测340nm的T%，要求≤0.8%；
杂散光的误差有多大：△A≤0.434ρ（10A-1）ρ为杂散光的强度
△A=A理论-A测
影响：杂散光使A-C曲线向下弯曲，在末端吸收处可能会出现假峰或无峰或峰小。
250nm以下的杂散光主要为可见光；220nm以下的杂散光很大，不宜用于定量分析。△λ越大，杂散光越强。
3.背景干扰：溶剂、试剂等背景；浊度背景；荧光
消除方法：选择合适的空白溶剂、参比液；浑浊会使A增大，产生正误差，且不易稳定，可采用离心或过滤方法防止吸附使A下降，若浊度稳定，用双波长或三波长，导数光谱法测定；荧光背景使A减少，I无穷大于C，而A=lgI/I0=KC，可采用池远离检测器、池后放荧光片、改变溶剂或者降低浓度、增加A-C曲线的点数等方法来消除。
（三）仪器的测量误差
①A=0.1～1.0（一般应用）；A=0.2～0.7（对比法）；A=0.434，误差最小，因此一般A选择在0.3～0.7之内，0.5时误差最大。
②使A处于合适范围的方法
ⅰ改变池的厚度（比色法中）
ⅱ改变浓度（uv）
ⅲ改变测定波长
③样品测定A值在A～C曲线线性范围内或尽量在直线中点附近；用对比法测定时应使A样尽量接近A标。
④回归直线方程的表示方式
n=5～7
A=KC+b (r≥0.99（比色法） K、b的有效数字位数分别为：b=×. ××× K=×××；r≥0.999（uv） K、b的有效数字位数分别为：b=×. ×××× K=××××)。
（四）操作误差
①吸收池配对——空白进行基线校正，有池校正与光强校正之分，校正后可放大看到噪声大小，从而判断b、K的取值。
②吸收池的位置和方向。
③池的污染：手的污染；洗得不干净；擦得不好。
④样品的温度应与实验室一致。
⑤池内有气泡。
⑥波长在紫外区，或用挥发性较强的有机溶剂，池应加盖：防止挥发，防灰尘。
⑦光敏样品：测定完立即离开光路。
⑧光电管疲劳：连续使用小于5小时。
⑨波长校正：找出最大吸收波长是否符合要求。
（五）为确保分光光度定量的可靠性，须注意：
△溶液浓度无称量、体积和温度误差；
△被测定物完全溶解，最好以超声溶解；
△如有必要，混浊应过滤或离心，且防止吸附损失；
△不要出现池壁吸收（配对性），做基线校正；
△池壁干净，池面方向与光方向一致，池内壁无气泡；
△若对吸光度的准确度要求高时，应考虑单色光纯度（对光谱带宽或狭缝宽度进行校正）；
△参比液的操作过程应和样品液（对照液）完全相同；
△样品吸光度在合适范围内测量，优先考虑改变池厚度；
△在A大和波长小时，杂散光引起A减小，尤其空白吸收效明显时；
△对吸光度和波长的准确度经常检查，杂散光检查在规定范围内；
△应遵照厂家推荐的扫描参数和时间常数；
△仪器环境干净、干燥，无外界干扰（电子干扰、热变化及阳光等）；
△回归直线方程的正确表达。

赞贴

拍砖