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液相色谱（LC）
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主题：【求助】峰前沿的厉害，一直解决不了，请各位指点一下

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发表于：2012/02/25 20:16:15 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
完全按照国家药典标准检测“黄芩提取物”，但是出来的峰很不正常，

如图所示

采购的新设备，全部都是新的，柱子换过几根，柱温40℃，所有试剂均为HPLC级。

请问要怎么才能解决这个问题，谢谢

<code>　　方法名称： 黄芩提取物－黄芩苷的测定－高效液相色谱法

　　应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定黄芩提取物中黄芩苷的含量。

　　本方法适用于黄芩经加工制成的提取物。

　　方法原理： 本品加甲醇溶解、稀释，摇匀，滤过，续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长280nm处检测黄芩苷的吸收值，计算出其含量。

　　试剂： 1.甲醇

　　2. 磷酸

　　仪器设备： 1 仪器

　　1.1 高效液相色谱仪

　　1.2 色谱柱

　　十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。

　　1.3 紫外吸收检测器

　　2色谱条件

　　2.1流动相：甲醇 水 磷酸 =47 53 0.2

　　2.2检测波长：280nm

　　2.3柱温：室温

　　试样制备： 1. 称取供试品

　　精密称定本品10mg，为供试品。

　　2. 对照品溶液的制备

　　精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含60mg的溶液。

　　3.供试品溶液的制备

　　取本品约10mg，精密称定，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取5mL，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。

　　操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长280nm处测定黄芩苷（C21H18O11）的峰面积，计算出其含量。

　　参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p280。</code>
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2012/2/25 20:18:26 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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2012/2/25 20:21:51 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是有杂峰没有分开？

上面贴的是中国药典2005年版的，2010年版的内容是一样的吧？
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2012/2/25 20:22:27 Last edit by tangtang
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2012/2/25 20:22:30 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
峰的拖尾因子0.72，不对称度0.42
每次检测的主峰都是这个样子。

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2012/2/25 20:22:57 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对照品溶液也是这样的峰形吗？
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2012/2/25 20:24:31 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 tangtang(tangtang) 发表:
是不是有杂峰没有分开？

上面贴的是中国药典2005年版的，2010年版的内容是一样的吧？


这个就是对照品的峰，2005版和2010版内容是一样的

检测样品时主峰也是这个造型
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2012/2/25 20:31:10 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用的是手动进样器还是自动进样器？

用50%甲醇溶解一点对照品试一下。或者就取1ml配好的对照品溶液，加1ml水，混匀后，进一针看看？
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2012/2/25 20:38:14 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用的手动进样器，10ul定量环，每次注入40ul

因为是完全按照药典检测，所以不能更改溶液的配置方法。

现在柱子多买了好几根，再不解决问题，就要被炒鱿鱼啦
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2012/2/25 20:42:32 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ssskkk(ssskkk) 发表:
用的手动进样器，10ul定量环，每次注入40ul

因为是完全按照药典检测，所以不能更改溶液的配置方法。

现在柱子多买了好几根，再不解决问题，就要被炒鱿鱼啦


我们遇到过使用手动进样器，溶剂效应明显一点。

先确定原因，不是马上就改变。

您如果点回复本贴，引用回复，就会发送提醒，更有利于讨论。
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2012/2/25 22:07:56 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不管是药典还是标准，都只是推茬方法。看你的图，要么就降低泄度，要么就改溶剂甲醇水
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2012/2/26 9:54:04 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 tangtang(tangtang) 发表:
原文由 ssskkk(ssskkk) 发表:
用的手动进样器，10ul定量环，每次注入40ul

因为是完全按照药典检测，所以不能更改溶液的配置方法。

现在柱子多买了好几根，再不解决问题，就要被炒鱿鱼啦


我们遇到过使用手动进样器，溶剂效应明显一点。

先确定原因，不是马上就改变。

您如果点回复本贴，引用回复，就会发送提醒，更有利于讨论。


好的，先按照您说的试试。
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