主题：【资料】M1检测技术支持

高效液相色谱法：

根据国标《GB 5413.37—2010》食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定

　实验用前处理：

实验仪器和好耗材包括：

恒温水浴锅 　溶剂过滤器(带真空泵)1000ml  高速匀质器 黄曲霉毒素免疫M1亲和柱玻璃纤维滤纸 玻璃注射器 无荧光特性玻璃试管 空气压力泵 超声波清洗机  定量滤纸 量筒 样品瓶 容量瓶 移液器或移液管

　　实验用试剂：色谱乙腈 色谱甲醇 氢氧化钠 石油醚 超纯水或去离子水等等

HPLC条件：

高效液相色谱仪 
色谱柱 C18柱，150*4.6mm，5um
流动相 乙腈－水（25：75）
荧光检测器： 激发波长365nm，发射波长435nm；
柱  温 室温
流速 1.0ml/min
进样量 20ul
出峰时间 10分钟左右





样品取样：真菌毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以必需保证样品收集和取样具有代表性。

样品前处理

牛奶 水浴加热至40度，离心用上清液过柱净化；

免疫柱净化步骤：完全符合GB/T 18980-2003

┅┅取出免疫亲和层析柱, 恢复至室温，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上。

┅┅将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。准确移取清澈液注入玻璃注射器；

┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约2-3mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；

┅┅更换玻璃注射器与亲和柱连接，在注射器中加入10ml水，调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。

┅┅准确加入4mL色谱级乙腈洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测。

注：收集管中的洗脱液即为纯化后的样品，可直接用ELISA,荧光和高效液相等方法检测。

HPLC 检测需要仪器与耗材

产品名称 说明 规格
黄曲霉毒素M1固体标准品 参比对照使用 100ug 1mg   
黄曲霉毒素M1液体标准品 浓度0.5ug/ml, 溶于乙腈 1ml 
PriboFast 黄曲霉素M1免疫亲和柱 用于 样品前处理柱 分析黄曲霉素 25/50T
PriboFast泵流操作架（8位） 用于免疫亲和柱净化样品处理，方便控制流速 
黄曲霉毒素检测专用玻璃纤维滤纸 用于去除HPLC检测时部分杂峰，有效提高灵敏度。110，1.5um 100P 
不锈钢均质器 高速匀浆样品，有效提高萃取效率 
旋转蒸发仪-超声波发生器 

酶联免疫检测法：符合国家标准

酶联免疫检测法采用竞争ELISA，在微孔板上预包被黄曲霉毒素B1抗原，加入样本（或黄曲霉毒素M1标准品溶液）及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M1抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素M1与预包被在板孔上的黄曲霉毒素M1抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M1抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液，读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素M1抗原的含量成负相关。对照标准曲线，即可得出相应残留物黄曲霉毒素M1的含量。

样品处理

牛奶 直接离心取上清液用于检测

奶粉及其他固状奶制品：需要溶解于去离子水中，离心取上清液用于检测

试剂盒检测时间：30分钟＋30分钟

交叉反应率：

Aflatoxin M1 100%
Aflatoxin B1 8%
Aflatoxin B2 10%
Aflatoxin G1 7%
Aflatoxin G2 5%

ELISA 方法检测需要：

说明 
PriboFast 黄曲霉毒素M1酶联免疫检测试剂盒 检测范围 (0.1 ppb －8.1ppb) 96孔
雷勃半支灭菌移液器（彩色） 多个量程：0.5-10; 20-200; 5-50; 1000-5000ul 支
雷勃八道半支灭菌移液器 量程： 5-50ul; 50-300ul 支
酶标仪 进口、国产仪器， 台

　　分析人员要求：

化学分析仪器及其相关专业或有高效液相色谱仪操作经验的人员。