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凝胶色谱（GPC）

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主题：【讨论】泪流满面请教各位大侠凝胶色谱中流动相加盐的目的和原理

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xiaoxin2809

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发表于：2012/02/27 22:42:27 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

本人凝胶色谱新手，在做一个项目，需要用凝胶色谱。美国药典论坛上已有方法，重复了人家方法发现有些地方不对，撇开这些不谈，先说说我的疑问吧！
1 美国药典上的流动相加了0.1M的硝酸钾，我试了一针加的，一针不加的，发现不加盐峰会前沿，加盐的峰很对称，请问在凝胶色谱里加盐的目的除了改善峰形还有什么作用吗？我更好奇的是盐是通过什么原理来改善峰形的？
2 还有一个很奇怪的现象，我的样品和两个杂质出峰时间重叠，即专属性不合格，这三种物质虽然都是钠盐，但大家请注意样品的分子量范围是1000-2000，而两个杂质的分子量一个是100多，一个是300多，就是说在分离原理为分子排阻的凝胶色谱里，分子量1000多的和100,300的一起出峰，改变流动相（换过纯水，也试过加大有机相比例）变化并不明显，这是为什么呢？难道现在的凝胶色谱已经不是单纯的分子排阻原理了，还是说样品的出峰时间除了和分子量有关，还和他们的水溶性有关？
3 还有一个现象我不能理解，就是走空白，也就是流动相的时候会出现一些溶剂峰，走样品的时候也会出现溶剂峰，但是样品中的溶剂峰的响应要比溶剂峰里的高多了，这是怎么回事呢？

这几个问题快把我折磨疯了，请高手解答！！

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2012/2/28 22:21:03 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

都没人理我吗？

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xydell

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2012/2/29 8:38:15 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

第二个问题，GPC的柱子不单是有排阻上限的，也有下限，分子量小于排阻下限的就分不开了。可能是这个原因吧，看看你用的柱子说明书。

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xiaoxin2809

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2012/3/1 22:28:24 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

关于第二个问题是我没说清楚，是这样，一共有5个物质，一个主成分，是一种低聚糖的钠盐，分子量1000-2000，还有4个杂质，其中两个是钠盐，分子量100多和300多，另外两个是中性分子，分子量100多和1000多一点点，出峰顺序是这样的，主峰先出（1000-2000），紧跟着是两个钠盐的杂质（100多和300多），这三个峰是重合的，再后面是分子量1000多的中性分子，最后为100多的中性分子，我特别不理解为什么两个小分子的钠盐溶液会这么早出峰，和它的存在形式或溶解性有关吗？

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小不董

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2012/3/2 11:00:12 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 xiaoxin2809(xiaoxin2809) 发表:
本人凝胶色谱新手，在做一个项目，需要用凝胶色谱。美国药典论坛上已有方法，重复了人家方法发现有些地方不对，撇开这些不谈，先说说我的疑问吧！
1 美国药典上的流动相加了0.1M的硝酸钾，我试了一针加的，一针不加的，发现不加盐峰会前沿，加盐的峰很对称，请问在凝胶色谱里加盐的目的除了改善峰形还有什么作用吗？我更好奇的是盐是通过什么原理来改善峰形的？
2 还有一个很奇怪的现象，我的样品和两个杂质出峰时间重叠，即专属性不合格，这三种物质虽然都是钠盐，但大家请注意样品的分子量范围是1000-2000，而两个杂质的分子量一个是100多，一个是300多，就是说在分离原理为分子排阻的凝胶色谱里，分子量1000多的和100,300的一起出峰，改变流动相（换过纯水，也试过加大有机相比例）变化并不明显，这是为什么呢？难道现在的凝胶色谱已经不是单纯的分子排阻原理了，还是说样品的出峰时间除了和分子量有关，还和他们的水溶性有关？
3 还有一个现象我不能理解，就是走空白，也就是流动相的时候会出现一些溶剂峰，走样品的时候也会出现溶剂峰，但是样品中的溶剂峰的响应要比溶剂峰里的高多了，这是怎么回事呢？

这几个问题快把我折磨疯了，请高手解答！！

加硝酸盐是为了消除化学键的作用，使用GPC，是为了尽量的使用体积排阻，如果有了化学键的作用，就会影响其保留时间，这样体积大的保留时间也会延后，这样测定的结果就不正确了。

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