8. 温度
HPLC柱最好在柱温箱中使用。重复性取决于温度控制。最佳的温度与特定的应用有关。温度影响洗脱液流动的线速度。在使用ChromSep玻璃柱的时候,一定要调节流速使压力保持在3000psi以下。
9. 贮存
一定不要在柱子内充满缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下贮存色谱柱。 贮存溶剂应当含有至少20%的有机溶剂,以防止有细菌的生长。
10. 柱效损失的可能原因
1. 额外的峰展宽。当使用小直径或者长度较短的柱子时,峰展宽的情况可能比较明显。要保证管路的长度和内径都保持最小。检查进样体积和检测器检查池体积是否适用于柱体积。
2. 洗脱的平衡时间不够。
3. 不正确柱温。
4. 不正确的修正浓度。
5. 床压缩。使用了过大的洗脱流速。将柱子反向,使用低流速。
11.柱效丧失和/或高背压
1. 颗粒物积聚在烧结物或者树脂床上(它们都会使背压增高)。如果柱压增高了,将柱子与进样器断开,运行泵,以验证背压的来源确实是来自柱子的颗粒污染(样品、洗脱液和系统)。倒转柱子,以反向的流动来冲洗柱子。如果这样不能解决问题,更换进口过滤器或者筛板。
2. 微生物在洗脱液中生长。倒转柱子,尝试以反向的流动来将污染物冲洗出柱子。更换进口过滤器或者筛板。
3. 有蛋白质脂肪,油脂污染或者极性化合物等污染。再生柱子(见第12节)。