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凝胶色谱（GPC）

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主题：【讨论】求助凝胶色谱提高信噪比，改善峰形的方法

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maqqiek

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发表于：2012/04/22 16:56:12 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

本人新接触一个项目，用CLND测样品中含氮杂质，用的是菲罗门的biosep-sec-s2000的凝胶色谱柱。在建立方法的时候遇到了几个问题，向各位大虾求助！
1.样品浓度配到100mg/ml,进样量40ul的时候，需要测的杂质的峰信噪比才9.7，但标准品咖啡因浓度5ppm，在同样的进样量时峰形已经展宽的很厉害了。怎么样才能保证杂质被检出，同时又能比较准确的定量呢？
2.我试了调节流动相里有机相的比例，改变流速，改变进样速度，发现有机相比例加大后，咖啡因的信噪比是提高了，但是峰变形严重，甚至还出现了分叉。流速增加也是同样的影响。有没有其他的方法可以提高信噪比同时又不会影响峰形呢？

这2个问题其实归结起来就是怎么提高信噪比，请有经验的前辈提供一些思路，多谢啦

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2012/4/22 20:41:54 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 maqqiek(maqqiek) 发表:
本人新接触一个项目，用CLND测样品中含氮杂质，用的是菲罗门的biosep-sec-s2000的凝胶色谱柱。在建立方法的时候遇到了几个问题，向各位大虾求助！
1.样品浓度配到100mg/ml,进样量40ul的时候，需要测的杂质的峰信噪比才9.7，但标准品咖啡因浓度5ppm，在同样的进样量时峰形已经展宽的很厉害了。怎么样才能保证杂质被检出，同时又能比较准确的定量呢？
2.我试了调节流动相里有机相的比例，改变流速，改变进样速度，发现有机相比例加大后，咖啡因的信噪比是提高了，但是峰变形严重，甚至还出现了分叉。流速增加也是同样的影响。有没有其他的方法可以提高信噪比同时又不会影响峰形呢？

这2个问题其实归结起来就是怎么提高信噪比，请有经验的前辈提供一些思路，多谢啦

CLND是什么？我记得咖啡因用气相色谱比较容易测定的，不知道为什么要用凝胶色谱来测定呢？至于峰型，对于凝胶色谱要消除化学键的作用，是否可以考虑使用什么缓冲盐来改善峰型。还有就是pH值，看是否有改善。

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