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主题：【转帖】微生物限度检查用培养基、试液、稀释剂、指示液的配制方法

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发表于：2012/05/03 12:13:16 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1、培养基
除另有规定外，培养基制备的灭菌条件为121℃20分钟。
1.1 营养琼脂培养基与营养肉汤培养基
1.1.1 营养琼脂培养基
胨 10g 琼脂 15～20g
氯化钠 5g 肉浸液 1000ml
取胨、氯化钠和琼脂加入肉浸液，加热溶解后，调PH为弱碱性，煮沸、滤清，调节PH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，灭菌。
1.1.2 营养肉汤培养基
胨 10g 肉浸液 1000ml
氯化钠 5g
取胨和氯化钠加入肉浸液，微温溶解后，调PH为弱碱性，煮沸，滤清，调节PH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，灭菌。
1.2 玫瑰红钠琼脂培养基
胨 5g 玫瑰红钠 0.0133g
葡萄糖 10g 琼脂 15～20g
磷酸二氢钾 1g 水 1000ml
硫酸镁 0.5g
除葡萄糖、玫瑰红钠外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、玫瑰红钠，分装，灭菌。
1.3 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD）
胨 10g 琼脂 15～20g
酵母浸出粉 5g 水 1000ml
葡萄糖 20g
除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖，分装，灭菌。
1.4 胆盐乳糖培养基（BL）
胨 20g 磷酸二氢钾 1.3g
乳糖 5g 牛胆盐（或去氧胆酸钠0.5g） 2g
氯化钠 5g 水 1000ml
磷酸氢二钾 4.0g
除乳糖、牛胆盐外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节PH值使灭菌后为7.4±0.2，煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，灭菌。
1.5 曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）
营养琼脂培养基 100ml 曙红钠指示液 2ml
20%乳糖溶液 5ml 亚甲蓝指示液 1.3～1.6ml
取营养琼脂培养基，加热溶化后，冷至60℃，按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液，摇匀，倾注平皿。
1.6 麦康凯琼脂培养基（MacC）
胨 20g 1%中性红指示液 3ml
乳糖 10g 琼脂 15～20g
牛胆盐 5g 水 1000ml
氯化钠 5g
除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节PH值使灭菌后为7.2±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，冷至约60℃，倾注平皿。
1.7 4-甲基伞形酮葡糖苷酸（4-Methylumbelliferyl-β-D-Glucuronide，MUG）培养基
胨 10g 磷酸二氢钾 0.9g
硫酸铵 5g 磷酸氢二钠（无水） 6.2g
硫酸锰 0.5mg 亚硫酸钠 40mg
硫酸锌 0.5mg 去氧胆酸钠 1g
硫酸镁 0.1g MUG 75mg
氯化钠 10g 水 1000ml
氯化钙 50mg
除MUG外，各成分溶解于1000ml水中，调节PH值使灭菌后为7.3±0.1，加入MUG，溶解后，每管分装5ml，115℃灭菌20分钟。
1.8 三糖铁琼脂培养基（TSI）
胨 20g 硫酸亚铁 0.2g
牛肉浸出粉 5g 硫代硫酸钠 0.2g
乳糖 10g 0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
蔗糖 10g 琼脂 12～15g
葡萄糖 1g 水 1000ml
氯化钠 5g
除三糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节PH值使灭菌后为7.3±0.1，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，制成高底层（2～3cm）短斜面。
1.9 四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）
胨 5g 硫代硫酸钠 30g
牛胆盐 1g 水 1000ml
硫酸钙 10g
取上述成分，混合，微温使溶解，灭菌。
临用前，取上述培养基，每10ml加入碘溶液（取碘6g与碘化钾5g，溶于20ml水中）0.2ml和亮绿试液0.1ml，混匀。
1.10 沙门、志贺菌属琼脂培养基（SS）
胨 5g 硫代硫酸钠 8.5g
牛肉浸出粉 5g 中性红指示液 2.5ml
乳糖 10g 亮绿试液 0.33ml
牛胆盐 8.5g 琼脂 20g
枸橼酸钠 8.5g 水 1000ml
枸橼酸铁铵 1g
除乳糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节PH值使灭菌后为7.2±0.1，滤过，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，灭菌，冷至60℃，倾注平皿。
1.11 胆盐硫乳琼脂培养基（DHL）
胨 20g 枸橼酸钠 1g
牛肉浸出粉 3g 枸橼酸铁铵 1g
乳糖 10g 中性红指示液 3ml
蔗糖 10g 琼脂 18～20g
去氧胆酸钠 1g 水 1000ml
硫代硫酸钠 2.3g
除糖、指示液及琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调节PH值使灭菌后为7.2±0.1，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余成分，摇匀，冷至60℃，倾注平皿。
1.12 溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基
胨 10g 溴化十六烷基三甲铵 0.3g
牛肉浸出粉 3g 琼脂 15～20g
氯化钠 5g 水 1000ml
除琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调节PH值使灭菌后为7.5±0.1，加入琼脂，加热溶化后，分装，灭菌，冷至60℃，倾注平皿。
1.13 亚碲酸盐肉汤培养基
临用前，取灭菌的营养肉汤培养基，每100ml中加入新配制的1%亚碲酸钠（钾）试液0.2ml，混匀，即得。
1.14 卵黄氯化钠琼脂培养基
胨 6g 10%氯化钠卵黄液 100ml
牛肉浸出粉 1.8g 琼脂 23g
氯化钠 30g 水 650ml
除10%氯化钠卵黄液外，取上述成分混合，微温使溶解，调节PH值使灭菌后为7.6±0.1，灭菌，待冷至约60℃，以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液，充分振摇，倾注平皿。
10%氯化钠卵黄液的制备取新鲜鸡蛋1个，以无菌操作取出卵黄，放入10%灭菌氯化钠溶液100ml中，充分振摇，即得。
1.15 甘露醇氯化钠琼脂培养基
胨 10g 酚磺酞指示液 2.5ml
牛肉浸出粉 1g 琼脂 15～20g
甘露醇 10g 水 1000ml
氯化钠 75g
除甘露醇、指示液及琼脂外，取上述成分混合，微温使溶解，调节PH值使灭菌后为7.4±0.2，加入琼脂，加热溶化后，滤过，分装，灭菌，冷至60℃，倾注平皿。
1.16 蛋白胨水培养基
胰蛋白胨 10g 水 1000ml
氯化钠 5g
取上述成分，混合，加热溶化，调节PH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管，灭菌。
1.17 磷酸盐葡萄糖胨水培养基
胨 7g 磷酸氢二钾 3.8g
葡萄糖 5g 水 1000ml
取上述成分，混合，微温使溶解，调节PH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管，121℃，灭菌15分钟。
1.18 枸橼酸盐培养基
氯化钠 5g 枸橼酸钠（无水） 2g
硫酸镁 0.2g 溴麝香草酚蓝指示液 20ml
磷酸氢二钾 1.0g 琼脂 15～20g
磷酸二氢铵 1g 水 1000ml
除指示液和琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调节PH值使灭菌后为6.9±0.1，加入琼脂，加热溶化，加入指示液，混匀，分装于小试管，灭菌，置成斜面。
注：所用琼脂应不含游离糖，用前用水浸泡冲洗。
1.19 糖、醇发酵培养基
基础液胨 10g 0.5%酸性品红指示液 10ml
糖、醇 0.5% （或溴麝香草酚蓝指示液6ml）
氯化钠 5g 水 1000ml
取胨和氯化钠加入水中，微温使溶解，调节PH值使灭菌后为7.4，加入指示液，混匀，分装每瓶100ml，121℃灭菌15分钟。
配制葡萄糖发酵培养基时，于100ml基础液加入0.5g葡萄糖，分装于含杜氏管（Durham）的小试管中，121℃灭菌15分钟。配制其他糖、醇发酵培养基时，将各种糖、醇分别配成10%溶液，与基础液同时于121℃灭菌15分钟。以无菌操作将5ml糖、醇溶液加入100ml基础液内，分装于灭菌小试管中。
注：糖、醇溶液亦可采用薄膜过滤法除菌。
1.20 脲（尿素）琼脂培养基
胨 1g 0.2%酚磺酞指示液 6ml
葡萄糖 1g 20%无菌脲溶液 100ml
氯化钠 5g 琼脂 20g
磷酸二氢钾 2g 水 1000ml
除脲和琼脂外，取上述成分，混合，调节PH值使灭菌后为7.2±0.1，加入琼脂，加热溶化并分装于锥型瓶，灭菌，冷至50～55℃，加入无菌脲溶液，混匀，分装于灭菌试管中，置成斜面。
1.21 氰化钾培养基
胨 3g 磷酸氢二钠 5.64g
氯化钠 5g 氰化钾试液 15ml
碳酸二氢钾 0.225g 水 1000ml
除氰化钾试液外，取上述成分，混合，调节PH值使灭菌后为7.5±0.1，灭菌，冷却后，加入氰化钾试液，分装于12mm×100mm灭菌试管内，每管4ml，立即用灭菌橡胶塞塞紧，置4℃保存。同时，以不加氰化钾试液的培养基作为对照培养基，分装于灭菌试管中。
1.22 赖氨酸脱羧酶试验培养基
胨 5g 1.6%溴甲酚紫指示液 1ml
酵母浸出粉 3g L-赖氨酸（DL-赖氨酸） 0.5(1)g
葡萄糖 1g 水 1000ml
除赖氨酸外，取上述成分，混合，加热溶解后，加入L-赖氨酸（DL-赖氨酸），调节PH值使灭菌后为6.8，同时以不加赖氨酸培养基作为对照。分装于灭菌的小试管内，每管2.5ml并滴加一层液体石蜡，121℃灭菌10分钟。
1.23 绿脓菌素（pyocyanin）测定用培养基（PDP琼脂）
胨 20g 甘油 10ml
氯化镁（无水） 1.4g 琼脂 18～20g
硫酸钾 10g 水 1000ml
取胨、氯化镁和硫酸钾加入水中，微温使溶解，调节PH值使灭菌后为7.3±0.1，加入甘油及琼脂，加热溶化，混匀，分装于试管，灭菌，置成斜面。
1.24 明胶培养基
胨 5g 明胶 120g
牛肉浸出粉 3g 水 1000ml
取上述成分加入水中，浸泡约20分钟，随时搅拌，加热使溶解，调节PH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管，灭菌。
1.25 硝酸盐胨水培养基
胨 10g 亚硝酸钠 0.5g
酵母浸出粉 3g 水 1000ml
硝酸钾 2g
取胨和酵母浸出粉加入水中，微温使溶解，调节PH值使灭菌后为7.3±0.1，加入硝酸钾和亚硝酸钠溶解，混匀，分装于含杜氏管的小试管，灭菌。

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2、试液
2.1 二盐酸二甲基对苯二胺试液取二盐酸二甲基对苯二胺0.1g，加水10ml，即得。需新鲜少量配制，于冷处避光保存，如试液变成红褐色，不可使用。
2.2 无菌对氨基苯甲酸试液取对氨基苯甲酸0.1g，加入含10ml水的带塞试管中，121℃灭菌20分钟。
2.3 亚碲酸钠（钾）试液取亚碲酸钠（钾）0.1g，加新鲜煮沸后冷至50℃的水10ml使溶解。
2.4 玫瑰红钠试液取玫瑰红钠试液0.1g，加水使溶解成75ml。
2.5 无菌枸橼酸钠-氯化钠试液取枸橼酸钠0.5g，加0.9%氯化钠溶液10ml，121℃灭菌20分钟。
2.6 草酸铵试液取草酸铵1g，加水溶解使成100ml。
2.7 亮绿试液取亮绿0.1g，加水100ml使溶解。
2.8 氢氧化钾试液取氢氧化钾40g，加水溶解使成100ml。
2.9 盐酸试液取盐酸8.4ml，加水稀释成100ml。
2.10 α-萘酚乙醇试液取α-萘酚6.0g，加无水乙醇溶解使成100ml。
2.11 氰化钾试液取氰化钾0.5g，加水溶解使成100ml。
2.12 氯化三苯四氮唑试液取氯化三苯四氮唑0.1g，加水溶解使成10ml。
2.13 靛基质试液取对二甲氨基苯甲醛5.0g，加入戊醇（或丁醇）75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深，或取对二甲氨基苯甲醛1.0g，加入95%乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，取浓盐酸20ml徐徐滴入。
3、稀释剂
3.1 0.9%无菌氯化钠溶液取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，121℃灭菌20分钟。
3.2 无菌聚山梨酯80-氯化钠溶液取1ml聚山梨酯80，加0.9%氯化钠溶液使成100ml，121℃灭菌20分钟。
3.3 无菌磷酸盐缓冲液（PH7.2）取磷酸氢二钠25.8g与磷酸二氢钠4.4g，加水稀释至1000ml，121℃灭菌20分钟。
4、指示液
4.1 中性红指示液取中性红1.0g，研细，加95%乙醇60ml使溶解，再加水至100ml。
变色范围 PH6.8～8.0（红→黄）。
4.2 甲基红指示液取甲基红0.1g，加95%乙醇300ml，使溶解后，加水至500ml，即得。
4.3 亚甲蓝指示液取亚甲蓝0.5g，加水溶解使成100ml。
4.4 酚磺酞指示液取亚甲蓝0.5g，加1mol/L氢氧化钠溶液2.82ml，使溶解，再加水至100ml。
变色范围 PH6.8～8.4（黄→红）。
4.5 溴甲酚紫指示液取溴甲酚紫1.6g，加95%乙醇溶解使成100ml。
变色范围 PH5.2～6.8（黄→紫）。
4.6 溴麝香草酚蓝指示液取溴麝香草酚蓝0.4g，加1mol/L氢氧化钠溶液0.64ml使溶解，再加水至100ml。
变色范围 PH6.0～7.6（黄→蓝）。
4.7 酸性品红指示液取酸性品红0.5g，加水100ml使溶解，再逐渐加1mol/L氢氧化钠溶液16ml，每加1滴均应将溶液充分摇匀后再加第2滴，直至溶液呈草黄色；于沸水内保持15分钟，再静置2小时，滤过，即得。
变色范围 PH6.0～7.4（黄→红）。
4.8 曙红钠指示液取曙红钠2.0g，加水溶解使成100ml。

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