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主题：【分享】草根能力对比--富硒酵母中总硒含量测定过程

浏览0 回复37 电梯直达
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发表于：2012/05/11 15:29:24 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
本人日常工作的一项内容就是测量血清硒元素。也经常测量其他一些生物样品，所以有条件参加这次能力对比。
昨天收到了样品，就立即开工啦。
该帖子作者被版主 委员长加 5积分， 2经验，加分理由：鼓励！
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2012/5/11 16:09:56 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我使用荧光法测量样品中的硒元素，首先要作的是消化样品。其实用别的仪器测量也需要消化样品。测量硒元素需要采用湿法消化样品。我测量的样品量比较少，所以使用的湿法消化方法多少有点土。
用减量法称量0.1g左右的样品粉末倒入10ml具塞试管内。一般生物组织样品含硒量应该在1ug/g数量级。荧光法用我这种方法能测量到0.05ug/g以上。检测灵敏度应该没有问题。
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2012/5/11 16:25:36 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
每个试管内加入样品量为0.1g左右，需要注意的是加样品需要直接加到试管底部，避免在管壁上沾上样品。
然后加入高氯酸0.2ml，硝酸1.0ml。其中硝酸的加入量是可以根据样品的量作调整，样品量多了，消化不完全时，可以加硝酸。这样可以保证样品消化完全。
具塞试管的塞子与试管是一一配套的，所以要各自作上记号，我是用玻璃刀刻上个标记。



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2012/5/11 16:30:21 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
加好了试样，就可以去加热消化啦。在通风橱内放一只电热套，套里面放一只搪瓷杯，试管就竖放在这个杯里，通风橱的口露得小，是为了让风能吹得大点。别笑话我这个电热套又脏又破，它成天被酸气薰着，干净不起来呀。
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2012/5/11 16:33:07 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

试管底部接触热的杯底，受热升温，上面露出的部门被通风口的风吹着冷却，这样酸蒸汽在管口附件会冷凝成液体流回底部，形成冷凝回流，延长酸加热的时间，使样品消化完全。
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〓疯子哥〓
madprodigy
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2012/5/11 17:04:27 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看来快递公司还是挺快的
您的最后检测结果如何？期待进一步结果～我们也其他其他收到样品的用户也积极分享检测过程
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happy水中月
lianlxh
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2012/5/11 18:59:18 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
期待楼主接下来和大家分享分析的过程和如何来报告结果。
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2012/5/11 20:56:37 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
http://vdisk.weibo.com/?leftnav=1&wvr=4
全部照片存在新浪微博网盘里。

刚才因为下班而中断叙述。现在继续。
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2012/5/11 21:09:01 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
消化过程是硒测量过程最容易产生误差的步骤。主要是导致测量结果偏低。对于固体生物样品，消化开始阶段易产生泡沫溢出试管导致试样损失，在消化的终点，如果消化过程不完全，残余的有机成分易导致干扰荧光增高荧光强度。特别是硝酸残余会增大荧光强度。过度的消化则导致硒的挥发损失。从我多年的消化血清样品经验看，硝酸--高氯酸湿法消化的终点如果以试管内产生高氯酸浓白色烟雾为终点，往往消化并不完全，可以继续加热，在消化至管内出现白色干涸物甚至几乎干涸也不会导致明显的硒损失。但干涸后继续加热时间超过数分钟，则将产生明显的硒损失。所以我一般是消化到管底侧壁产生白色干涸结垢至消化液完全干涸之间这段为消化结束的终点。毕竟消化时间较长，没法一直在旁边盯着看。只能每十来分钟过来瞧瞧，把到达消化终点的试管拿出来，其他的继续消化。它们的消化进程是不一致的。
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2012/5/11 21:23:40 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
消化开始时，试管中冒出棕色硝酸酸雾

消化开始时极易产生泡沫，堵住试管的泡沫会被加热产生的蒸汽顶出试管，所以要盯着点，赶紧拿出来振摇，把泡沫摇散，再放回去加热。

加热一会之后，固态样品被硝酸完全融解后就没有泡沫了，但消化液还是棕色的，伴随着大量棕色气体。

消化后期，消化液慢慢变清了。这时候，有机物已经分解得差不多了。不过，固体样品常会出现白色的砂粒状不溶物。有时候消化液会呈现淡淡的绿色。

刚拿出来的消化完成的样品，管底还剩一点点高氯酸液体，管内是浓白色高氯酸烟雾。管底侧壁有少量结垢。

全部样品都消化完成啦。
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2012/5/11 21:43:22 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
消化结束后，还要加入4mol/L的盐酸0.4ml，再加热几分钟。到此消化就完全结束了。如果是使用原子吸收或icp测量，就可以直接稀释后上机测量。但荧光法测定还需要加荧光探剂的。
测量硒元素的荧光探剂是2，3-二氨基奈。缩写为DAN。看清了，不是DNA！
每个试管加入0.5ml的 0.5%DAN溶液，（0.1mol/L盐酸配制）
            0.2ml的 0.04mol/L  EDTA溶液（0.01mol/L NaOH配制）
            纯水5ml
在旋涡混合器上振荡混匀，然后置于50度水浴中加热20分钟。
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