上面的为2012年5月14日(即今天)标样过中性氧化铝小柱后浓缩、定容后的色谱图，做这个是为了看看我的中性氧化铝小柱是不是有问题。上图出峰依次为：sudanI(保留时间5.819) 、II(保留时间10.638)、 III(保留时间16.117)，没有sudan IV的峰。问题1：sudanII、III的保留时间变了，这是为什么？

问题2：按国标GB19681 2005上的说法，过中性氧化铝小柱的流出顺序应该是sudanII、IV、I、III，而这里不应该没有IV的峰啊？

问题3：谱图22分钟后有大量杂质峰。

图三：

发现上面的问题后，重新进样标样走了一遍，结果色谱图20分钟后，峰形不好，有大量杂质峰，这是哪里来的杂质啊？

图四：

这是我做的辣椒油树脂加标样回收的色谱图，（做法为乙腈溶解振荡后过滤、浓缩、定容，为什么不用国标的上正己烷溶解后过中性氧化铝小柱，是因为过中性氧化铝小柱后回收极低），可以看到有目标峰，但峰面积太小了，回收率太低。

图五：

这是我做的辣椒粉加标样回收的色谱图，（做法为乙腈溶解振荡后过滤、浓缩、定容），可以看到有目标峰，但峰面积太小了，回收率太低。

图六：

这是我2012年5月12日做的，辣椒粉加标样过中性氧化铝小柱回收后的色谱图，图中没有sudanIII(保留时间12.952)、sudan IV(保留时间21.995)的峰，而且结合图二sudanII的保留时间变了，这是为什么，是不是过中性氧化铝小柱后保留时间就会变，这正常吗？

这几天一直在做苏丹红的检测，感觉比想象中的要难，主要是样品前处理这一块，因为是新手，以前没怎么接触液相，请各位专家帮忙分析一下，我应该怎么做？

0
赞贴
4
回帖
0
收藏
0
拍砖
版主
招募

为您推荐

近期热榜

热门活动

您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价

选参数看心得找厂商查方案

专属顾问快速对接

立即提交

可能感兴趣

crystal_cc_ice

禁止发帖修改昵称

ID：crystal_cc_ice

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2012/5/30 16:24:30 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

目前做辣椒粉里的苏丹红，我们是采用GPC也就是凝胶色谱来净化的，可以有效去除色素，并且回收率也还可以。

赞贴

拍砖

dadoudou12

禁止发帖修改昵称

ID：dadoudou12

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2012/6/5 9:54:50 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

看不到图，图呢

赞贴

拍砖

baitaji

禁止发帖修改昵称

ID：baitaji

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2012/6/7 22:14:04 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

图呢？图呢？

赞贴

拍砖

wu117229374

禁止发帖修改昵称

ID：wu117229374

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2012/6/8 11:08:41 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

苏丹红检测套装：

固相萃取柱：HiCaptSudan苏丹红专用柱(500mg/3mL，订货号：22-05003)

液相色谱柱：HiSepC18-T 150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm（订货号：0246150）

苏丹红是偶氮苯类人工色素,由于苏丹红具有潜在的致癌性, 中国和欧盟等多数国家都禁止其作为色素添加剂在食品中使用。然而, 仍有不少食品生产企业为了改善食品色泽、降低成本将其作为食用色素。我国质量监督部门检出了包括几家知名企业生产的众多含有苏丹红的食品, 引起了整个社会的关注。因此，建立快速可靠的检测方法至关重要。

目前报道的苏丹红的检测方法主要是采用液相色谱法。由于辣椒油、辣椒粉等食品成分复杂,液相色谱分离困难,易导致假阳性结果。国家标准的方法是采用正已烷作为萃取溶剂，用氧化铝固相萃取柱净化样品。但该方法样品处理过程复杂，而且氧化铝的活性不易控制，方法回收率难以得到保证。因此我们开发了HiCapt Sudan苏丹红专用固相萃取柱，建立了同时检测食品中四种苏丹红的高效液相色谱分析方法，较好地解决了这一问题。

方法的优势：

·<span style="'font: 7pt/normal "Times New Roman"; font-size-adjust: none; font-stretch: normal;'> 专利创新的苏丹红专用萃取填料，有效去除食品中的天然色素和植物油等杂质干扰

·<span style="'font: 7pt/normal "Times New Roman"; font-size-adjust: none; font-stretch: normal;'> 回收率稳定、重现，克服了传统方法中氧化铝活性不稳定的缺陷

·<span style="'font: 7pt/normal "Times New Roman"; font-size-adjust: none; font-stretch: normal;'> 方法简单、快速、节省溶剂

·<span style="'font: 7pt/normal "Times New Roman"; font-size-adjust: none; font-stretch: normal;'> 优化的色谱分离条件，有效去除杂质干扰

1. 样品处理：

1.1 样品提取：（参考国标GB/T 19681—2005）

1.1.1辣椒粉等粉状样品

称取0.5 g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入5mL正己烷，超声10min，5000r/min离心5 min后取上清液3 mL，待净化。

1.1.2辣椒油等油状样品

称取0.5 g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入3mL正己烷溶解，涡旋1分钟混匀，待净化。

1.1.3腊肠样品

将腊肠切成小丁，称取3.0 g, 放入10 mL离心管中，加入5 mL正己烷，超声10分钟，然后步骤同辣椒粉样品。

1.1.4番茄酱、甜辣酱样品

称取番茄酱1g，加入1 mL水，再加5 mL正己烷/丙酮（3/1，v/v），涡旋3分钟，超声10分钟，接着10000r/min离心5分钟，取上层有机相3 mL，加无水硫酸钠0.5 g，涡旋0.5分钟，静置取上清液作为上样液。

1.2固相萃取柱净化：HiCapt Sudan苏丹红专用柱(500mg/3mL)

（1）活化：在HiCapt Sudan柱中依次加入3mL丙酮，2 mL正己烷活化。

（2）萃取：将待净化液加入HiCapt Sudan柱中（在柱中正己烷液面为2mm时上样，此过程不要使柱干涸），再用200μL正己烷淋洗样品管，一并加入SPE柱中。流出液弃去。

（3）清洗：待上样液完全流出后，用2mL的3%异丙醇-正己烷溶液淋洗，淋洗液弃去，将小柱抽干。

（4）解吸：3mL丙酮解吸，收集解吸液。

（5）吹干及定容：解吸液50℃氮气吹干，加入1mL丙酮溶解并定容，用0.45μm有机滤膜过滤后HPLC分析。

2.色谱条件：

色谱柱：HiSep C18-T(150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm)；

流动相：流动相A：0.3%甲酸的水溶液：乙腈=85:15，

流动相B：0.3%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80:20；

流速：1mL/min

柱温：35℃

检测波长：520nm

进样量：10μL

梯度洗脱，梯度条件见下表：

时间/min	流动相		曲线
时间/min	A%	B%	曲线
0.01	30	70	线性
5	30	70	线性
40	0	100	线性
70	0	100	线性
72	30	70	线性
80	30	70	线性

注：40分钟后主要在冲洗柱子

3. 标准溶液液的配制

准确称取苏丹红I，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ标准品各5 mg(按其标称含量折算)，用乙酸乙酯定容至10 mL，分别配成500 mg/L的标准储备液。取储备液各200 L于10 mL容量瓶中，用丙酮定容，得4种苏丹红的质量浓度均为10 mg/L的混合标准储备液。将该溶液放置于4℃冰箱中避光保存。

4 结果

4.1 标准曲线与检出限

将10mg/L的苏丹红储备液用提取液逐级稀释配制了0.05 - 5 mg/L苏丹红标准溶液。按照选定的色谱条件测定，以峰面积对质量浓度进行线性回归。由表1可见，四种苏丹红在其质量浓度为0.05 - 5 mg/L 的范围内具有较好的线性关系，相关系数的平方均大于0.999；方法的检出限分别为21 - 41 ng/g（辣椒粉）；日内和日间相对标准偏差（RSD）分别小于8.9 %和8.7 %

表1线性回归方程、检测限LOD及定量限LOQ

组分	线性范围(mg/l)	线性回归方程			检测限LOD(ng/g)	定量限LOQ (ng/g)
组分	线性范围(mg/l)	a	b	r²	检测限LOD(ng/g)	定量限LOQ (ng/g)
苏丹红I	0.05-5	52712	1872	0.9995	41	137
苏丹红II	0.05-5	70425	172	0.9994	37	123
苏丹红III	0.05-5	113431	771	0.9990	25	82
苏丹红IV	0.05-5	120906	2673	0.9992	21	70

4.2 回收率和精密度

分别加入低、中、高3种质量浓度的苏丹红标准溶液于辣椒粉样品中，然后按照本实验方法进行测定，回收率为80.70.14%-107.88%（见表2）。图5为添加苏丹红的辣椒粉样品的色谱图。从该图可以看出，没有杂质干扰。且该方法具有较好的日内及日间精密度（见表2）；日内和日间相对标准偏差（RSD）分别小于8.9 %和8.7 %。

表2.方法的回收率和日内、日间精密度

分析物	添加水平/(μg/g)	回收率/%	RSD %
分析物	添加水平/(μg/g)	回收率/%	日内(n=5)	日间(n=3)
苏丹红I	0.2	99.84	8.9	8.7
	1	90.88	2.2	1.0
	3	91.32	5.2	2.3
苏丹红II	0.2	102.83	6.4	4.6
	1	107.88	4.2	3.6
	3	102.54	4.3	3.6
苏丹红III	0.2	81.18	3.8	4.1
	1	86.42	1.3	1.7
	3	84.71	2.6	2.4
苏丹红IV	0.2	89.72	5.5	2.7
	1	80.70	3.9	2.5
	3	82.93	1.9	2.3