主题：【分享】如何平衡色谱柱？

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发表于：2012/06/17 20:14:08 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

平衡过程中，将流速缓慢地提高
　　用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡)

色谱柱的再生　　进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议最好不使用您的高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱[/url]仪上的泵。
表1　建议用来冲洗的溶剂体积
色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积
125-4 1.6ml 30ml

250-4 3.2ml 60ml

250-10 -20ml 400ml

请根据下表选择您的再生方法：

极性固定相(如Si，NH2＊，DIOL基色谱填料)的再生：

正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水＊＊

非极性固定相(如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等)的再生：

水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水

0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱

注意：

在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。

＊＊如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。

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2012/6/17 20:15:04 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

平衡色谱柱的方法
☆反相色谱柱：
在经过出厂测试后是保存在乙腈/水的流动相体系中的，
①在平衡之前，请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶；
②新柱应先以10－20倍柱体积的5％甲醇或纯乙腈作流动相冲洗色谱柱。
③如果您所使用的流动相中含有缓冲盐或离子对试剂，应注意在乙腈冲洗后用高比例水"过渡"。即每天分析开始前必须先用高比例水冲洗30分钟以上（防止盐析出），再用缓冲盐流动相平衡；分析结束后必须先用高比例水冲洗30分钟以上，除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟（保护柱子）。
☆硅胶柱或极性色谱柱
在经过出厂测试后是保存在正己烷的流动相体系中的，相对于反相色谱柱来说，需要更长的时间来平衡。如果极性色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相平衡之前用异丙醇平衡。即每天分析开始前必须先用异丙醇冲洗10-20倍柱体积，再换用流动相平衡；分析结束后必须先用异丙醇冲洗10-20倍柱体积后再用正己烷冲洗30分钟（保护柱子）。

贴心提示：
①在确定分析样品的流动相时，要确保您使用的流动相和保存色谱柱的流动相互溶
②平衡过程中，将流速缓慢地提高，首先用低流速0.2ml/min将色谱柱平衡过夜（注意：断开检测器）；然后，将流速增加到1ml/mol冲洗30分钟，以便将色谱柱的填料充分平衡至最佳状态。可以保证色谱柱的使用寿命，并且保证在以后的使用中，获得分析结果的重现性。
③再用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂的流速如果较低，则需要较长的时间来平衡）
④请注意将预柱和分析柱一起平衡
⑤每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！

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