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主题：【第六届原创】HPLC法测定小儿氨酚黄那敏片马来酸氯苯那敏含量

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tangtang
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发表于：2012/10/09 07:21:08 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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这是我们实验室几年前做的，拿来参加原创大赛，支持化学药分析版。

HPLC法测定小儿氨酚黄那敏片马来酸氯苯那敏含量



【处方】  马来酸氯苯那敏  0.5g

                对乙酰氨基酚  125g

                    人工牛黄    5g

共制成  1000片



1.对照品与供试品

马来酸氯苯那敏对照品（中国药品生物制品检定所，批号100047-200305）

对乙酰氨基酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号100018-200408）

小儿氨酚黄那敏片（本公司，批号：20060201、20060801、20060802）

小儿氨酚黄那敏片阴性样品(不含马来酸氯苯那敏和对乙酰氨基酚、本公司)

2.马来酸氯苯那敏含量测定

2.1仪器与试剂

2.1.1仪器：岛津LC-10A高效液相色谱仪

2.1.2试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸为分析纯，水为超纯水。

2.2测定方法

【含量测定】照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录V D）测定

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；磷酸盐缓冲液（分别取乙腈250ml与0.02mol/L磷酸二氢钾溶液250ml加十二烷基磺酸钠0.68g，振摇使溶解，用磷酸调pH至3.5）－甲醇（10:9）作为流动相，检测波长为215nm，理论塔板数按马来酸氯苯那敏峰计算应不低于3000，马来酸氯苯那敏峰与其他峰的分离度应符合规定。

对照品溶液的制备  取马来酸氯苯那敏对照品约20mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇－0.5％醋酸（1：1）混合液适量，振摇使溶解，加上述混合液稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加上述混合液稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备  取本品研细，精密称取适量（约相当于马来酸氯苯那敏1mg），置50ml容量瓶中，加甲醇－0.5％醋酸（1:1）混合液适量，超声30分钟使溶解，加上述混合液稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，作为供试品溶液。

测定法  精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

2.3检测方法的确定

小儿氨酚黄敏片成分复杂，要对其中各组分分别定量测定，首选高效液相色谱法。参考某品种的色谱条件：“用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；磷酸盐缓冲液（分别取乙腈250ml与0.02mol/L磷酸二氢钾溶液250ml加十二烷基磺酸钠0.68g，振摇使溶解，用磷酸调pH至3.5）－甲醇（1：1）作为流动相，检测波长为215nm，理论塔板数按马来酸氯苯那敏峰计算应不低于3000，马来酸氯苯那敏峰与其他峰的分离度应符合规定。”

2.4流动相的确定

    经试验，原流动相有杂质峰未完全分开的情况，流动相成分修改为“磷酸盐缓冲液（分别取乙腈250ml与0.02mol/L磷酸二氢钾溶液250ml加十二烷基磺酸钠0.68g，振摇使溶解，用磷酸调pH至3.5）－甲醇（10：9）”

2.5.线性关系

取马来酸氯苯那敏对照品25.27mg，置50ml量瓶中，加甲醇－0.5％醋酸（1：1）混合液适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。制备标准曲线。

马来酸氯苯那敏在进样质量0.242592～0.566048μg的范围内，回归方程为：

y＝1546487.9x-4029，r2＝0.9999



线性图：



可见线性关系良好，截距较合理（4029/618863＝0.65％）

计算校正因子：

进样质量μg

峰面积

校正因子

RSD

242.592

372105

6.5195E-04

0.3%

323.456

496978

6.5085E-04

404.32

618863

6.5333E-04

485.184

744838

6.5140E-04

566.048

873451

6.4806E-04



平均校正因子：6.5111E-04

2.6计算方法的确定

将曲线中各点用两种方法计算含量（以进样质量为100％）：

峰面积

按标准曲线计算

平均值

RSD

372105

100.26%

100.02%

0.29%

496978

100.16%

618863

99.62%

744838

99.80%

873451

100.24%





峰面积

按校正因子计算

平均值

RSD

372105

99.87%

100.00%

0.30%

496978

100.04%

618863

99.66%

744838

99.96%

873451

100.47%



可见按标准曲线计算和按校正因子计算含量是一致的，为简便起见，定为用校正因子计算含量。

2.7专属性

2.7.1对照品色谱图

取马来酸氯苯那敏对照品，加甲醇－0.5％醋酸（1：1）混合液适量稀释成每ml约含马来酸氯苯那敏20μg的溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

2.7.2样品色谱图

取小儿氨酚黄敏片样品，研细，精密称取适量，加甲醇－0.5％醋酸（1：1）混合液适量稀释成每ml约含马来酸氯苯那敏20μg的溶液，滤过，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，在马来酸氯苯那敏峰相应的位置上呈现保留时间一致的色谱峰。

2.7.3空白样品色谱图

取小儿氨酚黄那敏片阴性样品（不含马来酸氯苯那敏），研细，按比例称取适量，加甲醇－0.5％醋酸（1：1）混合液适量稀释，精密量取20μl，滤过，注入液相色谱仪，记录色谱图，在马来酸氯苯那敏峰相应的位置上呈现一小杂质峰，与马来酸氯苯那敏对照品溶液的色谱峰相比，约为0.5％.

专属性实验结果表明本待测成分马来酸氯苯那敏专属性良好，其它成分基本无干扰。

2.8精密度

2.8.1同一溶液进样6次

取小儿氨酚黄敏片样品，研细，精密称取适量，加甲醇－0.5％醋酸（1：1）混合液适量稀释成每ml约含马来酸氯苯那敏20μg的溶液，滤过，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，同一溶液连续进样6次，结果：

次数

峰面积

RSD

n=6

618230

0.39%

624044

622256

623109

618782

622777



2.8.2样品重复测定6次

取小儿氨酚黄敏片样品，研细，精密称取适量，加甲醇－0.5％醋酸（1：1）混合液适量稀释成每ml约含马来酸氯苯那敏20μg的溶液，滤过，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，同法制备六份样品溶液：





称样量（g）

峰面积

颗粒含量

RSD

0.3330

625156

0.304%

0.62%

0.3340

624308

0.303%

0.3344

620833

0.301%

0.3302

608839

0.299%

0.3336

621815

0.302%

0.3320

620164

0.303%



结果表明精密度良好。

2.9回收率

取小儿氨酚黄那敏片阴性样品（不含马来酸氯苯那敏），按处方量加入马来酸氯苯那敏，研细，精密称取适量，加甲醇－0.5％醋酸（1：1）混合液适量稀释成每ml约含马来酸氯苯那敏20μg的溶液，滤过，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，同法制备六份样品溶液。因阴性样品不含马来酸氯苯那敏，回收率＝测得量/加入量。

回收率

RSD

98.15%

1.83%

101.73%

102.76%

98.46%

101.08%

100.53%



结果表明回收率良好。

2.10样品溶液的稳定性

取同一份样品溶液，分别测定0小时、1小时、2小时、4小时、24小时的含量：

放置时间（小时）

颗粒含量

RSD

0

0.303%

0.68％

1

0.297%

2

0.300%

4

0.302%

24

0.301%



结果表明样品溶液24小时内基本稳定。

2.11三批样品含量测定结果

批号

含量

20060201

101.1％

20060801

100.3％

20060802

101.5％



上述方法学研究结果表明：本实验确立的方法可用于小儿氨酚黄敏片的马来酸氯苯那敏含量测定，三批样品含量测定结果基本一致，限度定为每片含马来酸氯苯那敏按标示量计应为90.0～110.0％.
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2012/10/9 7:54:26 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
tangtang老师最近原创不断，威武
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影子
hyheying
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2012/10/9 8:35:18 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
2.9回收率

取小儿氨酚黄那敏片阴性样品（不含马来酸氯苯那敏），按处方量加入马来酸氯苯那敏，研细，精密称取适量，加甲醇－0.5％醋酸（1：1）混合液适量稀释成每ml约含马来酸氯苯那敏20μg的溶液，滤过，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，同法制备六份样品溶液。

阴性样品是自己按处方加各种辅料不？
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2012/10/9 8:36:01 Last edit by hyheying
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2012/10/9 8:37:02 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
因阴性样品不含马来酸氯苯那敏，回收率＝测得量/加入量。

这样说下就可以了？阴性样品不需要进样么？
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2012/10/9 8:38:28 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这样类似的东东我电脑里有无数个，但我不想参赛，晚上仔细拜读下，看看跟我们的有些什么区别
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2012/10/9 8:39:13 Last edit by hyheying
xiaowang268
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2012/10/9 8:53:22 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
呵呵，都有私藏的啊
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xiaowang268
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2012/10/9 8:53:46 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
赶紧给大家分享啊，期待！
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三人行
jncxyy2012
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2012/10/9 9:52:31 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这样类似的东东我电脑里有很多，大都是不能外泄资料。
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三人行
jncxyy2012
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2012/10/9 9:54:25 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品的稳定性试验，我们取0、1、2、4、8小时。
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老多_小多
emoc98311
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2012/10/9 11:27:27 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
色谱图呢？
传说马来酸氯苯那敏是两个峰
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tangtang
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2012/10/9 18:10:04 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 影子(hyheying) 发表:
2.9回收率

取小儿氨酚黄那敏片阴性样品（不含马来酸氯苯那敏），按处方量加入马来酸氯苯那敏，研细，精密称取适量，加甲醇－0.5％醋酸（1：1）混合液适量稀释成每ml约含马来酸氯苯那敏20μg的溶液，滤过，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，同法制备六份样品溶液。

阴性样品是自己按处方加各种辅料不？


对，就是不含待测成分的其余所有成分。
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