主题：【分享】固相萃取小总结

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发表于：2012/11/02 15:41:24 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

固相萃取(solid-phase extraction ,SPE)，SPE 已广泛应用于各行各业,包括生物样品中各种内源性物质和外源性物质及其代谢产物的分离、纯化,药物分析中的安眠类药物、抗组胺药物、抗抑郁药物、局麻药物、兴奋药物等的检测;法医学中的毒物分析(安非他明、大麻类、有机磷、麻醉剂、氰化物等) 及环境监测中某些金属离子的测定。

固相萃取的简要过程
1.一个样品包括分离物和干扰物通过吸附剂；
2.吸附剂选择性的保留分离物和一些干扰物，其他干扰物通过吸附剂；
3.用适当的溶剂淋洗吸附剂，使先前保留的干扰物选择性的淋洗掉，分离物保留在吸附剂床上；
4.纯化、浓缩的分离物从吸附剂上淋洗下来。

SPE 的方法建立:

1.　选择SPE小柱或滤膜　首先应根据待测物的理化性质和样品基质, 选择对待测物有较强保留能力的固定相。若待测物带负电荷, 可用阴离子交换填料, 反之则用阳离子交换填料。若为中性待测物, 可用反相填料萃取。SPE 小柱或滤膜的大小与规格应视样品中待测物的浓度大小而定。对于浓度较低的体内样品, 一般应选用尽量少的固定相填料萃取较大体积的样品。
2.　活化　萃取前先用充满小柱的溶剂冲洗小柱或用5～ 10ml溶剂冲洗滤膜。一般可先用甲醇等水溶性有机溶剂冲洗填料, 因为甲醇能润湿吸附剂表面, 并渗透到非极性的硅胶键合相中, 使硅胶更容易被水润湿, 之后再加入水或缓冲液冲洗。加样前, 应使SPE 填料保持湿润, 如果填料干燥会降低样品保留值; 而各小柱的干燥程度不一, 则会影响回收率的重现性。
3. 上样　一般可采取以下措施: (1) 用0. 1mol/L 酸或碱调节, 使pH < 3 或pH > 9, 离心取上层液萃取; (2) 用甲醇、乙腈等沉淀蛋白质后取上清液, 以水或缓冲液稀释后萃取; (3) 用酸或无机盐沉淀蛋白质后取上清液, 调节pH 值后萃取; (4) 超声15 min后加入水、缓冲液, 取上清液萃取。尿液样品中的药物浓度较高, 加样前先用水或缓冲液稀释, 必要时可用酸、碱水解反应破坏药物与蛋白质的结合, 然后萃取。流速应控制为2～ 4 m löm in, 流速快不利于待测物与固定相结合。
4.淋洗　反相SPE 的清洗溶剂多为水或缓冲液, 可在清洗液中加入少量有机溶剂、无机盐或调节pH 值。加入小柱的清洗液应不超过一个小柱的容积, 而SPE 滤膜为5～ 10 m l。
5.洗脱　应选用5～ 10m l 离子强度较弱但能洗下待测物的洗脱溶剂。若需较高灵敏度, 则可先将洗脱液挥干后, 再用流动相重组残留物后进样。体内样品洗脱后多含有水, 可选用冷冻干燥法。保留能力较弱的SPE 填料可用小体积、较弱的洗脱液洗下待测物,再用极性较强的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脱物。若待测物可电离, 可调节pH 值, 抑制样品离子化, 以增强待测物在反相SPE 填料中的保留, 洗脱时调节pH 值使其离子化并用较弱的溶剂洗脱, 收集洗脱液后再调节pH 值使其在HPLC分析中达到最佳分离效果。在洗脱过程中应减慢流速, 用两次小体积洗脱代替一次大体积洗脱, 回收率更高,