主题：【讨论】高致癌物黄曲霉毒素的检测方法

国标方法5min内同时分析6种黄曲霉素

翻了一下国标,一共有6个,无外乎这几种,薄层.荧光-HPLC,LC-MSMS,酶标,快检应该是类似于酶标的试剂盒方法

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原文由 angrboda(angrboda) 发表:
新闻图里的标题这不是扯淡么？
致癌物质成千上万种，你能知道是那种致癌物？
单说黄曲霉还有可能。
9分钟估计指测黄曲霉M1的双流向酶联免疫法。
GB5413.37中第四法，
预热2分钟，反应显色7分钟。

说实话，这也不见得是“扯淡”，因为现在uplc的分析速度确实很快。且如果后面接上MS/MS，搞致癌物质筛查，也不算一件难办的事情。当然，前提是MS/MS必须是性能很好的才可以。因为有些致癌物的限量标准本来就很低，有的可能低于0.0x ng/ml。

前处理不需要时间么？目前的情况是，大部分的样品是需要前处理的。
而往往前处理花费的时间占中检验时间的大头。

呵呵，我以为你只说的是上机分析。

标题党啊，我还以为有详细的检测方法呢~

怎么检测？怎么没有说呀？特别想知道。

原文由 heying923(heying923) 发表:
标题党啊，我还以为有详细的检测方法呢~

    研究团队成功选育出具有完全自主知识产权的黄曲霉毒素系列杂交瘤细胞株，研制出1C11、2C9、3G1等高亲和力抗体，这是目前国内外报道的灵敏度最高、特异性最强的黄曲霉毒素通用抗体和分量抗体。该团队还研制出黄曲霉毒素总量和M1、B1分量高灵敏、高特异性系列配套试纸条、试剂盒、黄曲霉毒素标准品替代物、免疫亲和微柱，开发出黄曲霉毒素免疫亲和荧光速测仪、黄曲霉毒素单光谱成像速测仪和黄曲霉毒素流动滞后免疫时间分辨荧光速测仪，如牛奶等单个样品从取样到结果打印最快9分钟即可完成，破解了黄曲霉毒素高灵敏快速准确定量检测技术难题。

    据介绍，这些技术成果和产品已应用于农产品（花生、玉米、稻米等）、食用油（花生油、玉米油等）、调味品（花生酱、酱油、醋等）、乳制品（鲜牛奶、奶粉等）和饲料（饼粕等）等五大类65种农产品和食品检测中，并被德国慕尼黑理工大学等一些国内外权威科研机构应用，为农产品和食品黄曲霉毒素检测、监管、评估与防控提供了有力的技术支撑，取得了显著社会经济效益。

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怎么检测？怎么没有说呀？特别想知道。

作者：夏静 来源：光明日报写的 快速检测 试纸，快速检测盒、荧光

1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡.在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强. 　　B1是最危险的致癌物，经常在玉米，花生，棉花种子，一些干果中常能检测到。它们在紫外线照射下能产生荧光，根据荧光颜色不同，将其分为B族和G族两大类及其衍生物。AFT目前已发现20余种。AFT主要污染粮油食品、动植物食品等；如花生、玉米，大米、小麦、豆类、坚果类、肉类、乳及乳制品、水产品等均有黄曲霉毒素污染。其中以花生和玉米污染最严重。家庭自制发酵食品也能检出黄曲霉毒素，尤其是高温高湿地区的粮油及制品种检出率更高。

在紫外线下黄曲霉毒素B1,B2发蓝色荧光黄曲霉毒素G1,G2发绿色荧光.黄曲霉毒素的相  黄曲霉毒素G2
对分子量为312-346.难溶于水易溶于油，甲醇丙酮和氯仿等有机溶剂，但不溶于石油醚己烷和乙醚中.一般在中性溶液中较稳定，但在强酸性溶液中稍有分解在pH9-10的强碱溶液中分解迅速.其纯品为无色结晶，耐高温黄曲霉毒素B1的分解温度为268℃紫外线对低浓度黄曲霉毒素有一定的破坏性.

通用方法
　　薄膜层析法和液相色谱法是目前国内绝大多数检测机构都在使用的方法。由于其检测周期长，程序复杂所需试剂繁多等缺点已远远不能满足现代检测要求.随着现代科学技术的不断发展，特别是免疫学生物化学，分子生物学的不断发展人们已创建了不少快速，简便特异，敏感低耗且适用的黄曲霉毒素检测方法.而且以金标试纸为代表的这些方法已经被先进国家所广泛使用，引进和消化这些先进的方法是我们检测领域的当务之急.免疫亲和柱法优点很多但由于检测费用过高，而无法普及.而一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法似乎更适用于中国值得推广。
其余方法
　　1，薄层层析法 　　薄层层析（Thin-Layer Chromatography,TLC）是在黄曲霉毒素研究方面应用最广的分离技术.自1990年它被列为AOAC （Association of Official Agricultural Chemists）标准方法，该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉毒素的功能. 　　2，液相色谱法 　　液相色谱（Liquid Chromatography,LC）与薄层层析在许多方面具有相似性二者互相补充.通常用TLC进行前期的条件设定，选择适宜的分离条件后再用LC进行黄曲霉毒素的定量测定。 　　3，免疫化学分析方法 　　利用具有高度专一性的单克隆抗体或多克隆抗体设计的黄曲霉毒素的免疫分析方法也是最常用的黄曲霉毒素检测方法.这类方法通常包括放射免疫分析方法（Radioimmunoassay,RIA），酶联免疫法（Enzyme-linked of Immunosorbent Assay,ELISA）和免疫层析法（Immunoaflinity Column Assay,ICA）.它们均可以对黄曲霉毒素进行定量测定。 　　（1） 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-HPLC法 　　免疫亲和柱法和酶联免疫吸附法虽然都可达到速简便效果但酶联免疫吸附法仅能检测单一毒素（如黄曲霉毒素B1）含量，而且易出现假阳性结果难以控制.免疫亲和柱法（包括荧光光度法和HPLC法）却能达到既定量准确又快速简便的要求。 　　免疫亲和柱的使用可以避免传统TLC和HPLC的缺点，同时免疫亲和柱与TLC和HPLC法结合可以大大提高工作效率提高灵敏度和准确度。 　　黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法是以单克隆免疫亲和柱为分离手段，用荧光计紫外灯作为检测工具的快速分析方法。它克服了TLC和HPLC法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒，异味的有机溶剂毒害操作人员和污染环境的缺点.同时黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法分析速度快，一个样品只需10-15min，比传统方法快几个小时甚至几天时间；仪器设备轻便容易携带自动化程度高，操作简单直接读出测试结果，可以在小型实验或现场使用.可以进行黄曲霉毒素总量 （B1B2G1G2） 的测定检测限可达到1ug/kg，达到黄曲霉毒素标准限量值以下测定范围为1-300ug/kg。 　　黄曲霉毒素免疫亲和柱-高效液相色谱法比传统的HPLC法更加安全可靠，灵敏度和准确度高。它采用单克隆抗体免疫技术可以特效性地将黄曲霉毒素或其他真菌毒素分离出来，分离效率和回收率高。 　　分析原理试样中的黄曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液经过过滤稀释后，用免疫亲和柱净化以甲醇将亲和柱上的黄曲霉毒素淋洗下来，在淋洗液中加入溴溶液衍生以提高测定灵敏度，然后用荧光分光光度计进行定量。也可以将甲醇-黄曲霉毒素淋洗液的一部分注入HPLC中对黄曲霉毒素B1,B2,G1,B2分别进行定量分析.免疫亲和柱是用大剂量的黄曲霉毒素单克隆抗体固化在水不溶性的载体上然后装柱而成.该方法的测定范围0-300ug/kg。 　　（2） 酶联免疫吸附法： 　　1996年，Nakane 建立了辣根过氧化物酶标记抗体的测定技术.由于该方法简便敏感，特异可作为多种抗原或抗体的测定，20世纪70年代后期该方法引入真菌毒素的检测中，下面介绍的是竞争性酶联免疫吸附间接法检测黄曲霉毒素B1。 　　原理：将已知抗原吸附在固态载体表面洗除末吸附抗原，加入一定量抗体与待测样品（含有抗原）提取液的混合液竞争培养后，在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物，与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合再加入酶底物。在酶的催化作用下，底物发生降解反应产生有色物质，通过酶标检测仪测出酶底物的降解量从而推知被测样品中的抗原量。 　　（3） 微柱筛选法 　　可以用来半定量测定各种食品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的总量。 　　原理 样品提取液中的黄曲霉毒素被微柱管风硅镁型吸附层吸附后在波长365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环，其荧光强度与黄曲霉毒素在一定的光密度范围内成正比例关系.若硅镁型吸附剂层未出现蓝紫色荧光则样品为阴性（方法灵敏度为5-10ug/kg）.由于在微柱上不能分离黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2，所以测得结果为总的黄曲霉毒素含量。 　　（4） 一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法 　　一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法。由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品这种方法能估算黄曲霉毒素的含量，非常适用于现场测试和进行大量样品的初选。