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主题：【第六届原创】双氰胺LC-MS/MS方法建立

浏览0 回复26 电梯直达
johne0212
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发表于：2013/01/28 21:49:23 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.首先声明此方法里面涉及的任何仪器和耗材都是推荐使用，并不代表必须使用此仪器和耗材。使用相同类型的仪器和耗材能得到相同的分析结果。

2.其次，由于双氰胺同位素内标会在二周后才能得到，所以推荐用两点或者三点标准加入法对阳性样品进行定量。

3.由于时间有限，此方法难免有不当之处，请大家根据自己实验室条件更新。

DCD Method Setup (Modified FDA Method)

Instrument Condition

Mobile Phase B10 mM Ammonium Acetate (pH=4.0)
Mobile Phase AAcetonitrile (LC-MS Grade)
ColumnWaters Acquity HIILIC,2.1*100 mm, 1.7um
Column Temperature35
Flow ratio0.3 mL/min
Gradient
TimeB (%)
0.0010
2.0010
4.0050
5.0050
5.0110
10.0010




MS/MS Parameters (Agilent 6410B+1200 RRLC)

Transition

Fragmentor

CE

Dwell Time (ms)

85.0-68.0 (Quantitative)

50

20

400

85.0-43.0 (Qualitative)

50

10

400





ESI Ion Source Parameters

ESI ModelPositive
Gas Flow13 mL/min
Pressure50 Psi
Gas Temperature350
Capillary Voltage 2000 V
ResolutionUnit (both)
EMV200
Divert ValveFrom 0.5 min to 3 min to MS




Sample Preparation

1.      Weigh exactly 1.00±0.01 g sample into 50 mL centrifuge tube

2.      Add 7.5 mL formic acid solution (2 %, v/v) to dissolve the sample by shaking 5 min, then ultrasonic 30 min, and make sure there is no lump produced during mixing.

3.      Add 12.5 mL acetonitrile and shake under 500 rpm for 5 min.

4.      Centrifuge at 8500 g for 10 min, and transfer the supernatant into sample vial for injection.

Chromatograms

1.      1 ppb DCD Standard



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yuduoling
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2013/1/28 22:51:21 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
除沃特世的仪器之外，别的仪器也可以做的吧
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yongbudaoweng
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2013/1/28 22:54:05 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感谢楼主分享
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dark_wzy
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2013/1/28 23:24:23 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢楼主分享。追问一句，楼主觉得这个方法开发的难点或者关键点在哪里？
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nphfm2009
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2013/1/29 7:00:40 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
“谢谢楼主分享。追问一句，楼主觉得这个方法开发的难点或者关键点在哪里？ ”同样也很想知道
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chy57589893
chy57589893
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2013/1/29 9:42:40 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
及时雨呀，参考了。谢谢
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sukiliang
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2013/1/29 9:58:45 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
参考了，谢谢楼主的分享！
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herebin
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2013/1/29 10:02:32 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有个问题：hilic柱子水相多出峰快，你0～2min有机相比例只有10％，这个时候出峰比较快的。这样话，你这样的条件，双氰胺在色谱柱中的保留是很弱的。
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johne0212
johne0212
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2013/1/29 11:10:22 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 herebin(herebin) 发表:
有个问题：hilic柱子水相多出峰快，你0～2min有机相比例只有10％，这个时候出峰比较快的。这样话，你这样的条件，双氰胺在色谱柱中的保留是很弱的。


由于时间仓促，方法有两处编写错误，一个是像您说HILLIC柱子应该是有机相该为90%。另一个是MS一个Transition输入有误，定量离子应该是68。已经修改，谢谢提醒。
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chenguangzhao
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2013/1/29 11:32:52 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我用amide柱子做，保留时间可以到3分半，比HILIC的结果好。
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arvid2007
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2013/1/29 13:07:28 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
全英文的啊，楼主是专门做方法开发的吗？
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手机版： 双氰胺LC-MS/MS方法建立
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