主题：【原创】关于HPLC流动相和样品配置问题

毕业工作半年了，半年里从啥也不会的菜鸟，到现在可以熟练使用液相，其中辛酸就不说了！

小子我是制药工程毕业的，专业方向属于药物合成与设计，奈何在读的时候由于种种原因，专业实验偏少，带我们做合成的老师当时又一根心带了两个巴基斯坦研究生（现在已经由于忽略了我们本科生而被学院解聘），好不容易熬到大四做本科工艺实验的时候，由于我们学院某位老师心血来潮，让药物合成的和生物制药（都属于制药工程）的学生在一起选课题，小子又很悲剧的被刷到了生物制药课题组，跟着老师做了一个工艺设计（给某7ACA生产企业做车间污水处理），更悲剧的是那个老师在1年前就被学校外派到BJ做项目去了，当时都不知道要带我们做毕业设计，那个恨啊！大四唯一个大型试验，从洗瓶子，到菌种的活化，配置培养基，发酵，提取发酵产物，HPLC测定含量，第一次知道原来HPLC是长那样的（学校用的是A的1100）。由于是毕业设计，也不用做实验，小子就在某个单位实习（行政的，就相当于打杂），实习期快到的时候（小子已经准备走了，面试了一家制药企业做QC），领导不让我走了，说是我们这边新成立了一个公司，让我做项目经理助理，小子当场拒绝了（原因吗，当时的解释是我是工科出身，做行政没有基础，另一方面是想从事技术相关工作，3年后考执业药师资格证），然后就没有消息了！后来我告诉他说我要走了，他才告诉我说公司计划成立一个药物分析部门，让我先留下来，到时候跟着做实验！于是老实的小子就被忽悠留下来了。。。

毕业到公司以后，被领导安排进了实验室，长达两周没事做，跟领导汇报说不让我做实验，领导一句话，我终于有实验做了！实验室有两台液相（L2000和A的1260），他们欺负我让我用L2000的，当时那个哭啊(实验室的都是在读研究生，我去的时候由于实验室5月份刚成立不久，1堆七八人用那个1260做一个实验），于是我大多看的也是1260的使用说明，让我用日立的，那个无语啊！不过通过他们的讲解1小时候我还是很熟练的玩会了，于是他们安排给我实验做，然后我就做出来了，他们觉得那台破机子还不错，于是不给我玩了，让我玩那个1260。。。

说了这么多，只是为了表明小子是毕业后半路出家做分析，然后没有师傅指导，所以有些问题自己也是想不明白！下边提出我的疑问大家帮忙讨论一下

在我做的某个实验中，需要配置0.2%的（pH 5.0）的三乙胺溶液，小子的配置顺序是先配制0.2%的三乙胺溶液，然后用磷酸调节pH到5.0，不知道这样子对不对！理论来讲，由于溶液体积变大，导致三乙胺浓度降低（磷酸量假如不大，不超过10ml），网上有同行说定容时留一部分体积，加入一定量磷酸后再调节ph

流动相采用１：１的甲和乙，在配置样品时要求先用甲超声溶解，再用乙定容！实验操作时发现等体积混合后总体积小于二者体积之和，于是先１：１配置后加入流动相定容，而不是直接用乙定容！

以上两个都不影响ＨＰＬＣ结果，只是小子不知道那样做符合不符合标准！

唉，没人带的孩子什么都要自己想！大家给给意见吧