主题：【讨论】实验完毕后，我们会用甲醇或乙腈冲洗柱子，再用之前还需要再用甲醇或乙腈冲洗吗？

原文由 qingqingcao(qingqingcao) 发表:

原文由 xiaowang268(xiaowang268) 发表:
大家能保证柱子再用之前是冲干净的吗

一般强保留的物质在前面，可以使用反冲方法。但是流速一定要小。对于3.5μm的绝对不能反冲，因为入口处的筛板是5μm的，一冲有可能会把填料冲出来。，所以不能反冲。但是5μm的可以反冲。

保证干净，就是需要用甲醇乙腈好好冲冲。

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实验完毕后，我们会用甲醇或乙腈冲洗柱子，再用之前还需要再用甲醇或乙腈冲洗吗？

使用前用流动相配比的纯水+相应有机溶剂 冲洗。然后换上流动相。

流动相配比的纯水+相应有机溶剂？没明白，不是流动相吗？

因为RP-hplc 一般用磷酸盐缓冲溶液-甲醇（乙腈，四氢呋喃等）作为流动相。一般我们保存RP柱用纯的甲醇或乙腈保存。所以，使用前用流动相配比的纯水+相应的有机溶剂冲洗，再换上流动相。

假如： 0.02mol/L磷酸氢二钾-MeOH=80:20, 那么开始用的时候用 纯水-MeOH=80:20  冲洗一段时间，然后再换上0.02mol/L磷酸氢二钾-MeOH=80:20。

具体的原因是：避免直接换上流动相，磷酸盐析出使得色谱柱堵塞。

但每次用完后，柱子和系统都是用水将盐冲洗掉了啊

不要直接上纯水洗涤RP柱子，应该在纯水中加些乙腈或者甲醇。应该知道 C18 是长链，如果纯水洗涤，长链蜷缩，不能够洗涤干净，所以要加入有机相。切记。不然损害色谱柱。

想想相似相容定律。

原文由 xiaowang268(xiaowang268) 发表:

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大家能保证柱子再用之前是冲干净的吗

一般强保留的物质在前面，可以使用反冲方法。但是流速一定要小。对于3.5μm的绝对不能反冲，因为入口处的筛板是5μm的，一冲有可能会把填料冲出来。，所以不能反冲。但是5μm的可以反冲。

保证干净，就是需要用甲醇乙腈好好冲冲。

反冲对柱子不好吧

原文由 qingqingcao(qingqingcao) 发表:

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大家能保证柱子再用之前是冲干净的吗

一般强保留的物质在前面，可以使用反冲方法。但是流速一定要小。对于3.5μm的绝对不能反冲，因为入口处的筛板是5μm的，一冲有可能会把填料冲出来。，所以不能反冲。但是5μm的可以反冲。

保证干净，就是需要用甲醇乙腈好好冲冲。

反冲对柱子不好吧

对于5微米的反冲柱子是可以的。流速不要太高。小于0.8ml/MIN。一些书上说反冲不好。估计他们自己没有装过色谱柱，不懂而已。对于一些很脏的色谱柱，那么反冲的效果很好。但是不建议一直反冲。只是很脏的话是可以反冲的。

他们说搅了柱床。这个说法无法证明。

直接用盐水做流动相，是有的，但是色谱柱半年差不多了。

原文由 影子(hyheying) 发表:
用之前一般是直接用流动相平衡了

原文由 xiaowang268(xiaowang268) 发表:
我们一般用甲醇或乙腈冲平，但换做异丙醇后，还是有很多杂志出来的啊，所以甲醇或乙腈不能保证冲洗干净啊

原文由 xiaowang268(xiaowang268) 发表:

原文由 青林(wyqql2060) 发表:

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实验完毕后，我们会用甲醇或乙腈冲洗柱子，再用之前还需要再用甲醇或乙腈冲洗吗？

使用前用流动相配比的纯水+相应有机溶剂 冲洗。然后换上流动相。

这个方法比较好

先用有机相再冲一下会更好些吧

原文由 儒雅凤(liwei7893) 发表:

原文由 xiaowang268(xiaowang268) 发表:
我们一般用甲醇或乙腈冲平，但换做异丙醇后，还是有很多杂志出来的啊，所以甲醇或乙腈不能保证冲洗干净啊

不能单纯用甲醇或乙腈来冲洗，应该根据样品的性质选择冲洗的流动相。

原文由 儒雅凤(liwei7893) 发表:

原文由 xiaowang268(xiaowang268) 发表:

原文由 青林(wyqql2060) 发表:

原文由 qingqingcao(qingqingcao) 发表:

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实验完毕后，我们会用甲醇或乙腈冲洗柱子，再用之前还需要再用甲醇或乙腈冲洗吗？

使用前用流动相配比的纯水+相应有机溶剂 冲洗。然后换上流动相。

这个方法比较好

先用有机相再冲一下会更好些吧

要看前面用的流动相是什么性质的。如果用过缓冲溶液，有盐等，不能先用有机溶剂冲洗。